Variación de la generación de estrés oxidativo mediado por ciprofloxacina en Escherichia coli en atmósferas controladas de CO2.

VIVIANA CANO ARISTIZÁBAL; MELISA DE LOS ANGELES QUINTEROS; MARIA GABRIELA PARAJE; PAULINA L PÁEZ

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología, XIV Congreso Argentino de Microbiología 2016; 2016

Asociación Argentina de Microbiología (aam), Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM)

ESUMEN APROBADOEl estrés oxidativo se define como un desbalance entre las sustancias oxidantes y antioxidantes. Se ha descripto que las clases más importantes de antibióticos bactericidas estimulan la producción de radical hidroxilo (OH?) en bacterias, lo cual contribuye a la muerte celular. El CO2 es un subproducto mayoritario del metabolismo celular. Se ha visto que el CO2 tanto endógeno como exógeno modifica la cinética de crecimiento de Escherichia coli enteropatogénica (ECEP) y que el bicarbonato mejora la actividad antibiótica in vitro de kanamicina y gentamicina en ECEP. Se ha demostrado que OH? y peróxido de hidrógeno (H2O2), reaccionan in vivo con CO2 aumentando la toxicidad de H2O2 en una manera dependiente de la dosis. El objetivo de este trabajo fue contribuir al entendimiento del mecanismo de acción de ciprofloxacina (CIP) como generador de estrés oxidativo en E. coli mediante la determinación de la producción de especies reactivas del oxígeno (ERO) y del nitrógeno (ERN) en atmósferas controladas de CO2 para evaluar su potencial implicancia en la salud humana. La generación de ERO y ERN en E. coli ATCC 25922 frente a CIP (0; 0,5 y 50 µg/mL) se determinaron en dos condiciones de CO2 (50 ppm y 5%) utilizando técnicas espectrofluorométricas y espectrofotométricas. En condiciones atmosféricas, el efecto de CIP en la producción de ERO es dependiente del tiempo de contacto y de la concentración de antibiótico utilizada. En atmósferas controladas de CO2 el tiempo de máximo estímulo de ERO es a las 2 h para las dos concentraciones de CIP ensayadas, este resultado nos estaría indicando que el CO2 está favoreciendo la formación de ERO en un periodo de tiempo más corto para CIP 50 µg/mL y está retrasando el estímulo de ERO para CIP 0,5 µg/mL. A menor concentración de CO2, la producción de ERO aumenta hasta las 2 h un 20,1 y 40,8 % con CIP 0,5 y 50 µg/mL; respectivamente. A mayor concentración de CO2, CIP 0,5 µg/mL genera un mayor incremento de ERO (26,2 %) que 50 µg/mL (14,6 %). Este comportamiento observado en diferentes condiciones de CO2 nos indica que la actividad de CIP mediada por la generación de ERO se ve modificada no sólo por la presencia de CO2 sino también por su concentración. Para evaluar la generación de ERN en E. coli, se utilizó la técnica de Griess. Se pudo observar que en condiciones atmosféricas el máximo estímulo se obtiene a las 4 h de incubación con CIP 0,5 y 50 µg/mL siendo mayor para CIP 0,5 µg/mL. En atmósferas controladas de CO2, sólo se observó un estímulo de ERN a las 2 h de incubación con CIP y en la menor concentración de CO2 mientras que a altas concentraciones de CO2 no hubo estímulo en la formación de ERN. Como conclusión podemos destacar que el CO2 modifica producción de ERO y ERN mediada por CIP lo cual afectaría su actividad antimicrobiana en E. coli.