IRIBARREN PABLO
Congresos y reuniones científicas
Título:
Activación de TLR2 regula la supervivencia de células microgliales mediante inducción de autofagia
Autor/es:
ARROYO, DS; SORIA, JA; GAVIGLIO, EA; GARCIA-KELLER, C; CANCELA, LM; RODRIGUEZ-GALAN, MC; IRIBARREN, P
Reunión:
Congreso; REUNIÓN ANUAL SOCIEDAD ARGENTINA DE INMUNOLOGÍA; 2011
Resumen:
 Las células microgliales (CM) son fagocitos del sistema nervioso central (SNC) que se activan en situaciones patológicas y aumentan su número (microgliosis) en las regiones afectadas. El control de este aumento es importante para prevenir el daño cerebral observado en procesos neuropatológicos. Puesto que los receptores semejantes a Toll (TLRs) activan a las CM, evaluamos si la estimulación de TLR2 regula la supervivencia de CM. El tratamiento de CM con ligandos de TLR2 (PGN, Pam3CSK4, etc.) indujo un aumento de la producción de IL-1b, TNFa, IL-6 y óxido nítrico (ON), indicando activación celular. Luego de 48hs de cultivo en presencia de ligandos de TLR2 se observó un aumento de la muerte de CM que no dependió de la activación de caspasas, TNFa u ON. Consecuentemente, el estudio cinético de la muerte celular, mediante tinción con AnV/7AAD, reveló la presencia de CM doble positivas (81% vs 7%, p<0,0001) sin aumento de apoptosis temprana. Mediante microscopía electrónica se observó intensa vacuolización en células BV2 estimuladas con PGN y se detectó la presencia de organelas de doble membrana compatibles con la ultraestructura de vesículas autofágicas. Observamos un aumento de vesículas teñidas con monodansylcadaverina en el citoplasma de células BV2 tratadas con PGN. Consistentemente, se detectó un incremento de Beclina-1 y LC3B en su isoforma clivada (LC3BII) mediante ensayos de western blot e inmunofluorescencia. Tanto el aumento de LC3BII como la muerte celular inducida por PGN fueron bloqueados en presencia de inhibidores de autofagia, 3-MA y LY924002. Demostramos in vivo que PGN incrementó la expresión de LC3BII en CM de ratón, la cual colocalizó con LAMP-1 (lisosomas), e indujo depleción de CM en el parénquima cerebral. Estos resultados novedosos demuestran in vitro e in vivo que TLR2 es capaz de regular el número de CM induciendo muerte autofágica, lo cual sería importante en el control de la microgliosis y respuestas inflamatorias potencialmente dañinas.