Recombinant and synthetic kunitz type proteins for the early diagnosis of fasciola hepatica in sheep

Lima

Congreso; X Congreso Internacional de Parasitología Neotropical y III Simposio de Ictioparasitología Neotropical; 2022

La Fasciolosis es una enfermedad emergente y desatendida que afecta a la ganadería produciendo daños económicos cuantiosos. El diagnóstico temprano de esta enfermedad permite anticipar medidas terapéuticas y una elección correcta de antiparasitarios. Ac-tualmente, el diagnóstico de Fasciola hepatica se basa en la detección de huevos diez sema-nas pos-infección debido a la ubicación del parásito adulto en los canalículos biliares. En este ensayo se detectaron los niveles de anticuerpos (IgG) en sueros de ovinos infectados con Fasciola hepatica, otras parasitosis y animales sanos como grupo control. Se estandari-zó la técnica de ELISA detectando valores de densidades ópticas para cada grupo. Las proteínas de tipo kunitz (FhKTM) son una familia de genes con actividad inhibidora de proteasas, altamente expresados en el parásito en etapas tempranas pos-infección. Para la sensibilización de placas de ELISA se utilizaron las FhKTM de tipo Kunitz 1.1, Kunitz 1.3 y Kunitz 4 recombinantes obtenidas como proteínas de fusión por clonación y expre-sión en E. coli, como así también una FhKTM proveniente de síntesis en fase sólida. El análisis de los resultados muestra diferencias significativas de Densidades Ópticas (DO) entre los grupos evaluados (p < 0.001): Infectados con F. hepatica (IFh), Infectados con otras parasitosis como coccidios y nematodes (IOP), animales sanos (controles), permi-tiendo diferenciar niveles de anticuerpos significativamente mayores en los sueros de ovinos IFh respecto al resto de los grupos cuando se utilizaron FhKTM1.1, FhKTM 4 ó FhKTM sintética. Para la evaluación de la sensibilidad y especificidad de la técnica de ELISA utilizando las proteínas FhKTM1.1, FhKTM 4 y FhKTM sintética, se analizaron las curvas ROC mostrando valores entre 70 y 80%. Se evidenció una baja reactividad cruzada en los niveles de anticuerpos detectados en los IFh respecto a los IOP por esta técnica. Para el análisis de los datos, se utilizaron métodos estadísticos no paramétricos, prueba de Kruskal-Wallis para el efecto fijo (DO) seguido de una comparación múltiple mediante la Prueba de Dunn (p<0.05). Estos resultados demuestran la capacidad de las proteínas FhKTM recombinantes y sintética para ser usadas en el diagnóstico temprano de la fasciolosis en ovinos. El uso de proteínas recombinantes producidas localmente facilitaría el diagnóstico de esta enfermedad ampliamente distribuida en nuestra región