Development of isogenic cellular models to validate SL inducers in BRCA-1 deficient tumor cells

Paraná

Congreso; LIV Reunión Anual de Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; 2018

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular

La deficiencia en el mecanismo de reparación de ADN por Recombinación Homóloga (HR) es un conocido promotor de la tumorigénesis, la cual es mediada por la activación aberrante de mecanismos de reparación propensos a errores. Esta deficiencia está vinculada a mutaciones somáticas o germinales en los genes BRCA, así como de otros genes que participan directa o indirectamente en la vía de HR. Esto ha llevado a un notable interés por desarrollar terapias que apunten a esta característica tumoral, dentro de la que se destacan los inhibidores de PARPs recientemente aprobados por la FDA. Recientemente en nuestro laboratorio hemos realizado un screening fenotípico utilizando citometría de flujo para identificar inductores de letalidad sintética (LS) en células BRCA1 y BRCA2-deficientes. Utilizando una librería ?open source? de 627 inhibidores de quinasas identificamos a ?Polo Like Kinase 1? (PLK1) como un blanco molecular para la inducción de letalidad sintética en células deficientes en BRCA1. En este trabajo nos enfocamos en desarrollar modelos celulares isógenicos de validación que se diferencien exclusivamente en los niveles de expresión de BRCA1, utilizando líneas tumorales parentales de mama y ovario. Para lograr este objetivo utilizamos un sistema lentiviral para regular negativamente la expresión de BRCA1 mediante shRNAs en las líneas MDA-231 (mama) y SKOV3 (ovario). Estas líneas fueron utilizadas para validar los resultados obtenidos con los inhibdores de PLK1 identificados en el screening, así como con inhibidores comerciales de PLK1 que se encuentran actualmente en ensayos clínicos.