MORÓN VÍCTOR GABRIEL
Congresos y reuniones científicas
Título:
Presentación de antígenos en la cápside de baculovirus: una estrategia para despertar respuestas inmunes celulares
Autor/es:
PAULA MOLINARI; MARÍA INÉS CRESPO; MARIA JOSE GRAVISACO; OSCAR TABOGA; GABRIEL MORÓN
Lugar:
La Falda, Cordoba
Reunión:
Congreso; LVI Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
Actualmente, uno de los puntos de mayor dificultad en el desarrollo de vacunas de nueva generación exitosas se basa en la inducción de una fuerte y duradera respuesta celular de memoria. Los baculovirus (BVs) son una familia de virus que infectan artrópodos y son incapaces de replicarse en células de mamíferos. Tienen fuertes propiedades adyuvantes, promoviendo respuestas humorales y celulares contra los antígenos coadministrados mediante la producción de mediadores inflamatorios.
Nuestro objetivo es evaluar la capacidad de presentación antigénica e inmunopotenciación de las respuestas inmunes celulares mediadas por BVs recombinantes y estudiar los mecanismos involucrados, usando ovoalbúmina (OVA) en la cápside como antígeno modelo.
Se construyó un BV recombinante que porta una copia extra de la proteína VP39 de la cápside fusionada a OVA (OVA-BVs) bajo el promotor de poliedrina y se probó la colocalización e incorporación de la fusión OVA-VP39 a la partícula viral por Western blot e inmunomicroscopía electrónica. Para evaluar la capacidad de inmunopotenciación, se inyectaron ratones Balb/c por vía intravenosa con 1x107 de BVs y a las 6hs se obtuvieron muestras de suero. Por ensayos de ELISA se comprobó que los BVs indujeron la producción de 8±2 ng/ml INF y 0,8±0,1 ng/ml de IL-12p40 en sangre. Al mismo tiempo, por marcación intracitoplásmatica se detectó en los esplenocitos de ratones inoculados con BVs (vs PBS control) 1,63 % (0,20%)(P<0,05) de células NK IFNg+ y 0,35% (0,08%)(P<0,05) de NKT IFNg+. In vitro, por citometría de flujo se observó que BMCDs capturaron GFP-BVs luego de una incubación de 90´. BMDCs de ratones TLR4KO y salvajes incubadas 18hs con BVs aumentaron la expresión de las moléculas CMH II, CD40 y CD86 y la secreción de IL-6 e IL-12. Finalmente, DCs esplénicas de ratones C57BL-6 incubadas con OVA-BV fueron capaces de presentar efectivamente el epitope CD8+ OVA257-264 a un hibridoma T CD8+.
Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que los BVs serían capaces de potenciar una respuesta inmune celular debido a que inducen una fuerte producción INF in vivo, producido por las células NK y NKT y son endocitados específicamente por DCs induciendo su maduración. Además, se demostró la capacidad de los BVs para introducir antígenos heterólogos en la vía de procesamiento del CMH I para su presentación a células T CD8+, demostrando la potencialidad de los BVs como vectores de inmunización para el desarrollo de respuestas inmunes celulares.
Nuestro objetivo es evaluar la capacidad de presentación antigénica e inmunopotenciación de las respuestas inmunes celulares mediadas por BVs recombinantes y estudiar los mecanismos involucrados, usando ovoalbúmina (OVA) en la cápside como antígeno modelo.
Se construyó un BV recombinante que porta una copia extra de la proteína VP39 de la cápside fusionada a OVA (OVA-BVs) bajo el promotor de poliedrina y se probó la colocalización e incorporación de la fusión OVA-VP39 a la partícula viral por Western blot e inmunomicroscopía electrónica. Para evaluar la capacidad de inmunopotenciación, se inyectaron ratones Balb/c por vía intravenosa con 1x107 de BVs y a las 6hs se obtuvieron muestras de suero. Por ensayos de ELISA se comprobó que los BVs indujeron la producción de 8±2 ng/ml INF y 0,8±0,1 ng/ml de IL-12p40 en sangre. Al mismo tiempo, por marcación intracitoplásmatica se detectó en los esplenocitos de ratones inoculados con BVs (vs PBS control) 1,63 % (0,20%)(P<0,05) de células NK IFNg+ y 0,35% (0,08%)(P<0,05) de NKT IFNg+. In vitro, por citometría de flujo se observó que BMCDs capturaron GFP-BVs luego de una incubación de 90´. BMDCs de ratones TLR4KO y salvajes incubadas 18hs con BVs aumentaron la expresión de las moléculas CMH II, CD40 y CD86 y la secreción de IL-6 e IL-12. Finalmente, DCs esplénicas de ratones C57BL-6 incubadas con OVA-BV fueron capaces de presentar efectivamente el epitope CD8+ OVA257-264 a un hibridoma T CD8+.
Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que los BVs serían capaces de potenciar una respuesta inmune celular debido a que inducen una fuerte producción INF in vivo, producido por las células NK y NKT y son endocitados específicamente por DCs induciendo su maduración. Además, se demostró la capacidad de los BVs para introducir antígenos heterólogos en la vía de procesamiento del CMH I para su presentación a células T CD8+, demostrando la potencialidad de los BVs como vectores de inmunización para el desarrollo de respuestas inmunes celulares.
