Desarrollo y Validación de una Metodología para el Estudio en Ratas de los Perfiles Plasmáticos de AZT y de Nuevos Derivados de AZT
Mario A. Quevedo*, Margarita C. Briñón
Departamento de Farmacia ? Facultad de Ciencias Químicas ? U.N.C.
*alfredoq@dqo.fcq.unc.edu.ar
La zidovudina (3'-azido-3'-deoxitimidina), es un inhibidor nucleosídico de la enzima viral transcriptasa reversa, utilizada actualmente en el tratamiento del Síndrome de
En base a ello, en este trabajo se presenta la obtención del perfil plasmático en ratas de AZT. Para ello, se desarrolló y validó una metodología directamente aplicable al estudio de los nuevos derivados obtenidos en nuestro grupo de trabajo.
Materiales y Métodos
Se utilizaron ratas Wistar de 300-
Se cuantificó por HPLC con detección UV (267 nm), en un equipo Agilent s1100, empleando una columna Synergi 4 mm Fusion C18, fase móvil buffer fosfato pH 2,5:MeOH:THF (68:30:2), 1 ml/min, 35 °C. La muestra se resuspendió en AcCN/H2O (25:75). Se tomaron 4 muestras por cada animal (0,6 ml totales), por triplicado para cada tiempo muestreado. Luego de la cuantificación, se graficó el log de la concentración vs. tiempo, y se calculó el t1/2 a partir de la pendiente resultante.
Resultados
En las condiciones cromatográficas establecidas para AZT se logró una resolución (R = 14,2) y un factor de capacidad (k´ = 2,2) adecuados considerando las sustancias endógenas presentes en la matriz plasmática. Para el método de cuantificación se determinó que la respuesta fue lineal entre 1,07-73,00 mM, con un límite de detección y cuantificación de 0,89 y 1,07 mM, respectivamente.
Se obtuvieron porcentajes de recuperación aceptables para la metodología empleada en la preparación y cuantificación de la muestra: 54,00 mM = 97,86 % (sd= 2,05; n=3) y 382,00 mM = 97,18% (sd = 3,91; n=3). Se determinó un tiempo de vida media para AZT de 1,56 (± 0,14) hs.
El método de cuantificación y preparación de la muestra fue extendido al derivado AZT-Iso, hallando resoluciones cromatográficas adecuadas respecto de AZT y los compuestos endógenos, así como también recuperaciones adecuadas desde la matriz plasmática (96,4 %, sd= 6,91; 50 µM).
Conclusiones
La metodología desarrollada fue apropiada para la determinación del tiempo de vida media de AZT in vivo, encontrando valores de t1/2 comparables a los informados en bibliografía. Por otra parte, las condiciones de ensayo establecidas en el presente trabajo, se desarrollaron específicamente teniendo en cuenta las propiedades fisicoquímicas y la estabilidad química y enzimática de nuestros nuevos derivados de AZT. En base a los resultados obtenidos, la metodología empleada puede aplicarse directamente al estudio de los perfiles plasmáticos in vivo de estos nuevos derivados.