Determinación Ultrasensible de Gliadina Mediante Inmunoensayos Utilizando Nanopartículas de Plata

MERCADAL, PABLO; FRAIRE, JUAN C.; MOTRICH, RUBEN D.; CORONADO, EDUARDO A.

Cordoba

Congreso; VI Congreso Internacional de ciencia y tecnologia de los alimentos; 2016

El gluten es un conjunto de proteínas, contenidas en la harina de los cereales trigo, cebada, centeno, avena y sus especies hibridas. Este complejo proteico está compuesto de gliadina y glutenina. La gliadina es la responsable de provocar la celiaquía, una enfermedad autoinmune que produce intolerancia al gluten. Actualmente el contenido de gliadina en un alimento se determina por métodos del tipo ELISA. Esta técnica requiere de la utilización de grandes cantidades de reactivos y varias etapas de lavado. En este trabajo demostramos un nuevo método basado en las propiedades ópticas de nanopartículas de Ag para cuantificar la presencia de gliadina. El nuevo método presenta ventajas considerables en cuanto al límite de detección, simplificación de pasos, uso de menor cantidad de reactivos, y menor costo que el método ELISA. El principio de la técnica desarrollada se basa en combinar el cambio que experimenta la respuesta óptica de una dispersión coloidal de nanoesferas de plata (Ag NSs) funcionalizadas con estreptavidina y biotina (STV-biotina) en una relación molar (1:1:1) con la capacidad de reconocimiento biomolecular del anticuerpo especifico para gliadina. En una primera etapa se induce la aglomeración controlada de las Ag NSs (formación de dímeros de Ag NSs) en presencia de una inmunoglubulina G Biotiniliada (Biot-IgG) que actúa como puente molecular entre las Ag NSs funcionalizadas con (STV)-biotina. La formación de estas estructuras diméricas se evidencia experimentalmente por una disminución de la intensidad de extinción (absorción + dispersión). Una vez seleccionada la concentración óptima de Biot-IgG para favorecer la mayor formación de dímeros, en una segunda etapa, se efectúa el mismo experimento en presencia de un antígeno el cual inhibe la formación de estructuras diméricas y produce una variación en la intensidad de extinción en función de la concentración de antígeno. Este hecho permite obtener una curva de calibración y cuantificar específicamente el analito (gliadina) hasta concentraciones de 0.015 pg/mL. La validez de esta técnica, denominada IDILA (Intensity depletion inmunolinked assay) fue comparada con ensayos ELISA. Asímismo, demostramos su aplicabilidad en la detección de gliadina en muestras reales de alimentos. Dado que la cuantificación y detección IDILA puede realizarse utilizando los mismos equipos que se requieren para la técnica de ELISA (microplato y lector de microplatos) su implementación en laboratorios convencionales es directa, sin equipamiento adicional sofisticado.