Control de Parvovirus B19 en plasma para la producción de Gammaglobulina anti-D (Rh)

G. RODRÍGUEZ LOMBARDI

CABA

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

ASOCIACION ARGENTINA DE MICROBIOLOGIA

Control de Parvovirus B19 en plasma para la producción de Gammaglobulina anti-D (Rh) Gonzalo Rodríguez L, Federico Farías , Marcela Martínez, María Susana Vitali, - Área Desarrollo de Productos y Procesos-UNC-HEMODERIVADOS ? Universidad Nacional de Córdoba?Córdoba. grodriguez@hemo.unc.edu.arINTRODUCCIÓNEl Parvovirus B19 Humano (B19) ha sido identificado como el agente causal de enfermedades como eritema infeccioso, crisis aplásica transiente en pacientes con anemia hemolítica y ha sido asociado a muerte fetal, anemia crónica y artritis. Es un virus que se transmite por vía aérea, transfusiones de sangre y por productos derivados de plasma. La gammaglobulina anti-D(Rh) es un hemoderivado que se administra a mujeres embarazadas para prevenir la enfermedad hemolítica del recién nacido. Para garantizar la calidad del producto en cuanto a seguridad viral la Farmacopea Europea ha establecido que los pooles de plasma humano utilizados en la producción de la Gammaglobulina anti-D deben ser testeados para detectar la presencia de ADN del Parvovirus B19 y éstos no deben exceder la concentración de 104 UI/ml.OBJETIVODiseñar un esquema de control de ADN/B19 para identificar aquellos plasmas aptos para la producción de Gammaglobulina anti-D con una carga viral menor a 104 UI/ml.MATERIALES Y MÉTODOSMuestras de plasma de donaciones individuales (MI), pooles de 100 donantes (P100) y pooles de producción con al menos 1000 unidades (PP) fueron testeados para ADN/B19 mediante una técnica de PCR ?in-house? semicuantitativa y validada, con una sensibilidad de 1500UI/ml (positive cut-off en el 95% de los ensayos), acoplado a una segunda PCR (Nested) confirmatoria. Anticuerpos de tipo IgG contra proteínas VP2 (anti-B19) fueron testeados con un Enzimoinmunoanálisis en las MI.RESULTADOSDe 107 MI, 14 (13%) fueron positivas para ADN/B19 con una carga viral menor a 1500 UI/ml y 93 (87%) resultaron negativas. El 75% de las MI presentaron IgG específica contra B19. En todas las MI ADN/B19 positivas se detectó IgG específica contra B19 a excepción de una muestra (Fig. 1). En los pooles P100, 2/125 (2%) fueron positivos para ADN/B19 con una carga viral mayor a 1500UI/ml mientras que 18/125 (14%) fueron positivos con un título menor a 1500UI/ml, el resto resultaron negativos (Fig. 2). En los pooles PP se encontró que 13/73 (18%) fueron positivos para ADN/B19 con un título mayor a 1500UI/ml y 48/73 (66%) fueron positivos con un título menor a 1500UI/ml, mientras que sólo un 16% resultaron negativos (Fig. 3). CONCLUSIONESDebido a la alta incidencia de detección de ADN/B19, la estrategia de screening de la materia prima en la industria de los hemoderivados posee características diferentes y más aún cuando se trata de un plasma hiperinmune (anti-D) con alto impacto en la suficiencia de los productos del plasma. Los resultados obtenidos nos permiten demostrar que el control de ADN/B19 en los P100 es la mejor alternativa, ya que considerando los pooles positivos con carga viral menor a 1500 UI/ml y los plasmas negativos, se recupera el 98% de los plasmas analizados. Pooles mayores requieren de una logística diferente de reanálisis, provocando de esta manera demoras en los tiempos productivos o descartando todo el pool de producción.La presencia de anticuerpos neutralizantes de tipo IgG en los donantes ADN/B19 negativos sugerirían un estadío de infección pasado mientras que la presencia de estos anticuerpos en donantes ADN/B19 positivos con baja carga viral, indicaría un probable estado de portadores o infección persistente. La detección del ADN/B19, la presencia de los anticuerpos neutralizantes en pooles de plasma utilizados en la producción de las gammaglobulinas y los métodos de inactivación viral, son herramientas útiles que tienen por objeto brindar mayor seguridad en lo relacionado a la transmisión potencial por hemoderivados.