Aseguramiento de la calidad de la técnica de qPCR para la detección de ADN de Parvorirus B19 Humano en pooles de plasma humano.

Cordoba

Congreso; XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2018

Sociedad Argentina de Virología

Introducción: El Parvovirus Humano B19 (VB19) es un virus ADN (ADN-B19) no envuelto que tiene la capacidad de circular en sangre con altos títulos (1014 partículas/ml), por lo que existe riesgo de transmisión por productos derivados del plasma si no se toman ciertas medidas de seguridad biológica. Las infecciones por VB19 están asociadas a enfermedades como eritema infeccioso, crisis aplásica transitoria, artropatía e . Una técnica no comercial basada en PCR a Tiempo Real (qPCR) fue desarrollada en este laboratorio para la detección y cuantificación del ADN-B19 en pooles de plasma humano (PPH) destinados a la producción de Gammaglobulina anti-Rh. La qPCR ha sido validada acorde a los requerimientos de Farmacopea Europea (FE) quien establece que la técnica debe ser capaz de detectar y cuantificar correctamente los PPH analizados y seleccionar aquellos que contengan <104 UI/ml de ADN-B19 destinados a la producción de este medicamento hemoderivado, evitando infecciones iatrogénicas en mujeres embarazadas. La participación en programas de control de calidad externo (CCE) resulta indispensable para el aseguramiento de la calidad de una PCR. Mediante ellos es posible evaluar y monitorear la perfomance de la técnica y detectar desviaciones que permitan realizar mejoras. Para obtener un resultado ?SATISFACTORIO? en el CCE todas las muestras analizadas de los distintos genotipos de VB19 deben ser correctamente cuantificadas y las muestras libres de ADN-B19 deben ser no reactivas. Objetivo: Evaluar la perfomance de la técnica de qPCR mediante la participación en el programa de CCE internacional (Proficiency Testing Scheme PTS170) organizado por European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare (EDQM), para verificar el cumplimiento de las exigencias y normativas vigentes (FE).Materiales y métodos: Panel PTS 170: 4 muestras negativas para AND-B19; 6 muestras positivas para ADN-B19: genotipo 1a2 con 5.104 UI/mL (2 muestras) y con 2.103 UI/mL (2 muestras); genotipo 2 con 1.105 UI/mL (una muestra) y genotipo 3a con 1.106 UI/mL (una muestra).Purificación AND-B19: QIAamp MinElute Virus Spin Kit (Qiagen) ®. qPCR: iTaqManTM Universal Probes Supermix Biorad, Applied Biosystems ® 7500. Región NS de VB19 (primers y probe).Material Calibrador: 3rd WHO International Standard DNA-B19 (NIBSC).Resultados: La técnica fue capaz de cuantificar correctamente todas las muestras positivas pertenecientes a los 3 genotipos virales y clasificar correctamente todas las negativas. El resultado final evaluado por el EDQM fue ?SATISFACTORIO?, el método permite calificar como apto aquel pool de plasma que contenga <104 UI/ml de ADN-B19. Conclusiones: El estudio de CCE permitió verificar la perfomance de la técnica de qPCR para la detección cuantitativa del ADN-B19 en PPH destinados a la producción de Gammaglobulina anti-Rh en este laboratorio, acorde a los requerimientos regulatorios.