RESUMEN

El virus de la hepatitis A (VHA) setransmite por vía fecal-oral, por contacto directo entre personas o por laingestión de agua y alimentos contaminados. Sin embargo, existen reportes deinfecciones asociadas a transfusiones de sangre o productos derivados delplasma (hemoderivados). Con el propósito de incrementar la seguridad biológicade los hemoderivados, resulta esencial la implementación de técnicas deamplificación de ácidos nucleicos (NAT) para la detección del ARN/VHA enmezclas de plasma humano empleadas para su elaboración. Estas técnicas debenser sometidas a un riguroso proceso de validación que garantice laconfiabilidad de los resultados, acorde a normas internacionales de calidad.Según la Farmacopea Europea (FE), se debe demostrar que la técnica esespecífica, robusta y capaz de detectar 10² UI/mL de ARN/VHA. Elobjetivo fue desarrollar y validar una técnica que cumpla con losrequerimientos de FE para su implementación en el tamizaje molecular de VHA delplasma destinado a la producción de hemoderivados. Se desarrolló una técnica detranscripción reversa seguida de PCR en tiempo real en un único paso(?one-step? RT-qPCR) para la detección del ARN/VHA que incluye la amplificaciónsimultánea de un control interno exógeno basado en ARN. Como resultado de lavalidación, se concluyó que la técnica es específica, robusta, precisa y poseeun límite de detección de 5,2 UI/mL y un límite de cuantificación de 10 UI/mL.La performance de la técnica fue verificada satisfactoriamente mediante laparticipación en un programa de control de calidad externo organizado por laDirección Europea de Calidad de los Medicamentos (EDQM). Adicionalmente, sedeterminó que la reacción de PCR tiene una eficiencia del 97%. En conclusión,la técnica desarrollada cumple ampliamente con los parámetros de validaciónevaluados según la normativa vigente para ser empleada como técnica de tamizajemolecular de VHA en muestras de plasma destinadas a la producción dehemoderivados.