RODRÍGUEZ LOMBARDI GONZALO RAMÓN
Congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación e implementación de metodología para la detección de virus de hepatitis E en muestras de carne y productos derivados
Lugar:
CABA
Reunión:
Congreso; VIII Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos (CICYTAC 2022); 2022
Institución organizadora:
VIII Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos (CICYTAC 2022)
Resumen:
El virus de la hepatitis E (HEV) se transmite principalmente por las vías fecal-oral
y zoonótica. Se ha descripto la transmisión alimentaria de genotipos zoonóticos
(HEV-3 y HEV-4) a través del consumo de carne cruda o poco cocida de cerdo,
jabalí, ciervo o productos derivados contaminados con el virus. Hasta la fecha
han sido publicados pocos trabajos sobre detección del HEV en alimentos
derivados porcinos, como salchichas, salames y patés, y las tasas de detección
informadas en los mismos son variables. Esto se debe principalmente a que no
existen protocolos estandarizados ni regulación oficial gubernamental (en ningún
país) para la detección del HEV en carne o productos derivados, ni en pescado,
y la mayoría de los estudios existentes no han determinado la eficiencia y
sensibilidad de los métodos de detección aplicados. Los objetivos del presente
estudio fueron: explorar metodologías de extracción y concentración viral
involucradas en el procesamiento de muestras de carne; obtener protocolos
confiables y reproducibles para la detección de HEV en muestras de alimentos
utilizando un control interno exógeno de RNA (CI) y un transcripto de RNA-HEV
para estandarizar y monitorear el proceso; e implementar la metodología
seleccionada para el estudio de muestras de alimentos comercializados en
nuestra región. Para ello, evaluamos en nuestro laboratorio condiciones
experimentales pre-analíticas para la detección de HEV en matrices cárnicas
seguidas por RT-PCR en tiempo real, optando por la combinación que mostró
recuperación viral más elevada. Se probaron dos métodos mecánicos de
disrupción de tejidos (ultra-turrax y mortero), dos soluciones para la
homogeneización (PBS y TRIzol), y tres técnicas de extracción de ácidos
y zoonótica. Se ha descripto la transmisión alimentaria de genotipos zoonóticos
(HEV-3 y HEV-4) a través del consumo de carne cruda o poco cocida de cerdo,
jabalí, ciervo o productos derivados contaminados con el virus. Hasta la fecha
han sido publicados pocos trabajos sobre detección del HEV en alimentos
derivados porcinos, como salchichas, salames y patés, y las tasas de detección
informadas en los mismos son variables. Esto se debe principalmente a que no
existen protocolos estandarizados ni regulación oficial gubernamental (en ningún
país) para la detección del HEV en carne o productos derivados, ni en pescado,
y la mayoría de los estudios existentes no han determinado la eficiencia y
sensibilidad de los métodos de detección aplicados. Los objetivos del presente
estudio fueron: explorar metodologías de extracción y concentración viral
involucradas en el procesamiento de muestras de carne; obtener protocolos
confiables y reproducibles para la detección de HEV en muestras de alimentos
utilizando un control interno exógeno de RNA (CI) y un transcripto de RNA-HEV
para estandarizar y monitorear el proceso; e implementar la metodología
seleccionada para el estudio de muestras de alimentos comercializados en
nuestra región. Para ello, evaluamos en nuestro laboratorio condiciones
experimentales pre-analíticas para la detección de HEV en matrices cárnicas
seguidas por RT-PCR en tiempo real, optando por la combinación que mostró
recuperación viral más elevada. Se probaron dos métodos mecánicos de
disrupción de tejidos (ultra-turrax y mortero), dos soluciones para la
homogeneización (PBS y TRIzol), y tres técnicas de extracción de ácidos
nucleicos (TRIzol, columnas comerciales a base de sílice y perlas magnéticas),
en tres tipos de carnes contaminadas artificialmente: carne de músculo de cerdo,
pescado (salmón) y salame. Luego de la estandarización del protocolo, se
procesaron muestras de salame obtenidas en mercados de Córdoba entre junio
2020 y marzo 2022 (n=67) y muestras de carne de cerdos destinados a la
producción de alimentos embutidos (n=14). Se arribó a un protocolo final
estandarizado (en el que se obtuvieron mejores porcentajes de recuperación)
utilizando TRIzol y mortero como método de homogeneización y disrupción
mecánica de los tejidos, seguido de extracción del RNA con columnas
comerciales. En dicho protocolo, los porcentajes de recuperación en las
muestras artificialmente contaminadas con transcripto RNA-HEV fueron 18,5%
en salame, 26,3% en salmón y 34,1% para carne de cerdo, detectando
adecuadamente el CI en todos los casos. Con este protocolo, todas las muestras
colectadas a campo resultaron negativas. Los resultados muestran que el
protocolo obtenido de detección molecular de HEV con CI es un método eficiente
para el monitoreo de este virus en las tres matrices analizadas, que podría
aplicarse en estudios destinados a evaluar el rol de estos alimentos como posible
fuente de infección y contribuir en la prevención de su transmisión.
pescado (salmón) y salame. Luego de la estandarización del protocolo, se
procesaron muestras de salame obtenidas en mercados de Córdoba entre junio
2020 y marzo 2022 (n=67) y muestras de carne de cerdos destinados a la
producción de alimentos embutidos (n=14). Se arribó a un protocolo final
estandarizado (en el que se obtuvieron mejores porcentajes de recuperación)
utilizando TRIzol y mortero como método de homogeneización y disrupción
mecánica de los tejidos, seguido de extracción del RNA con columnas
comerciales. En dicho protocolo, los porcentajes de recuperación en las
muestras artificialmente contaminadas con transcripto RNA-HEV fueron 18,5%
en salame, 26,3% en salmón y 34,1% para carne de cerdo, detectando
adecuadamente el CI en todos los casos. Con este protocolo, todas las muestras
colectadas a campo resultaron negativas. Los resultados muestran que el
protocolo obtenido de detección molecular de HEV con CI es un método eficiente
para el monitoreo de este virus en las tres matrices analizadas, que podría
aplicarse en estudios destinados a evaluar el rol de estos alimentos como posible
fuente de infección y contribuir en la prevención de su transmisión.
