RELACION ESTRUCTURA- ACTIVIDAD DE UN GRUPO DE FENILPROPANOIDES CON ACTIVIDAD FRENTE A Aspergillus flavus.

BISOGNO,F; MASCOTTI,M; KURINA SANZ,M; ENRIZ,D; GIANNINI,F

SAN LUIS ARGENTINA

Congreso; XXVI CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA; 2006

AQA

Introduccion: Los hongos filamentosos del género Aspergillus han demostrado ser un problema verdadero en cuanto a la incidencia de infecciones oportunistas y a su capacidad de producir toxinas con reconocida actividad hepatocarcinogénica que afectan gravemente a la seguridad de muchos alimentos1. Como parte de un estudio para obtener nuevas estructuras líderes  con actividad antifúngica frente a hongos del genero2 mencionado, se estudió la actividad antifungica de Drupamina (compuesto 12 de la Figura 1), metabolito mayoritario de Baccharis grisebachii  (Asteraceae) ampliamente distribuido en el centro oeste de Argentina. Con el fin de realizar un estudio de relación estructura actividad antifúngica se estudiaron varios compuestos estructuralmente relacionados con Drupamina los cuales fueron modificados en nuestro laboratorio.   Figura 1                                 Metodología:   Síntesis de los compuestos: Los compuestos 1, 2, 3, 6 y 8 son comerciales (Fluka y Sigma). El compuesto 12 fue aislado de Baccharis grisebachii. Los correspondientes carboximetil derivados (compuestos 5, 7 y10) fueron preparados mediante metilación clásica con CH2N2 en Et2O a partir de sus respectivos ácidos. Los compuestos 5 y 9 fueron preparados a partir de 4 y 12 respectivamente, mediante una metilación con Me2SO4 en medio básico. El compuesto 11 fue preparado a partir de 12 con Ac2O en piridina.   Actividad antifúngica cualitativa: se realizo un primer estudio cualitativo de actividad mediante la técnica de Bioautografia3 que consiste en sembrar placas de TLC con  10mg de cada compuesto disueltos en acetona, control negativo (acetona) y control positivo (Miconazol). Se realiza una solución de agua peptonada al 1%, con 50 ml de Twin, se esteriliza en autoclave. Luego se agregan a dicha solución esporas de Aspergilus flavus, en una concentración del orden de 10 5 esporas/ml. La concentración de esporas en la solución se cuantifica utilizando el método de recuento leucocitario con cámara de Neubauer. Posteriormente se realiza una dilución de 1ml de esta solución en 9ml de medio de cultivo PDA. Se deposita en uno de los bordes de la TLC 1ml de esta solución y se realiza un extendido. Éstas se incuban en cámara húmeda durante 4 días. Se toman fotografías y se miden los halos de inhibición observados.   Actividad antifúngica cuantitativa: para este estudio se realizaron ensayos in-vitro, por el método de dilución en agar usando Agar Saboureaud-Cloranfenicol, para todos los compuestos que habían presentado actividad cualitativa se determino la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima)4 (frente a Aspergilus flavus. Los compuestos fueron diluidos en DMSO formando soluciones que agregadas al medio de cultivo resultaba una concentración del compuesto a evaluar entre 7.5 y 250 mg/ml. La concentración final  de DMSO en el medio de ensayo no superaba el  2 %. Mediante el uso de una micropipeta se inoculaba  el medio con 5 ml de la suspensión de esporas. de Aspergilus flavus . Se incluyo como controle positivos en el ensayo Miconazol. Una solución libre de drogas se utilizó como blanco. La CIM se definió como la mínima concentración del compuesto que no mostraba desarrollo o crecimiento del hongo posterior al tiempo de incubación.   RESULTADOS   Actividad Antifúngica cualitativa: de todos los  compuestos evaluados, solo presentaron actividad antifúngica significativa las moléculas  1, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11 y 12, siendo los derivados 4, 8 y 9 muy  activos con un efecto antifúngico similar o aun mayor al que presenta Miconazol, el compuesto de referencia.   Actividad Antifúngica cuantitativa. Los resultados obtenidos se presentan en la  Tabla1:   Tabla1: COMPUESTO CIM μg/ml 1 250 3 > 250 4 125 7 > 250 8 31.25 9 62.5 10 250 11 > 250 12 > 250 Miconazol (control +) 125   Tal como puede apreciarse desde esta tabla existe una buena correlación entre los resultados cualitativos (bioatugrafia) y los obtenidos a partir de las CIM. Los compuestos 8, 9 y 4 presentaron los valores mas bajos de CIM. Analizando sus estructuras y comparándolas con el resto de lo compuestos se encuentra que estas moléculas  son las únicas que presentan un grupo carboxilo en la cadena alilica  y un grupo oximetilo sobre el anillo aromático, en el primer caso en posición meta respecto a la cadena y en el segundo en posición para. El resto de los compuestos, que son menos activos o inactivos no tiene estas características estructurales. El compuesto 4, con una actividad menor (CIM de 125 mg/ml) no tiene el grupo carboxilo y carece del grupo oximetilo.   CONCLUSIONES.   Se reporta aquí una nueva serie de compuestos con interesante actividad antifúngica. Entre los compuestos evaluados, las moléculas 8 y 9 resultaron las más activas de la       serie. Es interesante remarcar que en un estudio paralelo se mostró que el compuesto 8 presenta muy baja toxicidad en comparación con los compuestos de referencia lo que lo convierte en un excelente candidato para estudios. mayores     Referencias:   1-     Food and Chemical Toxicology 44 (2006) 670–677 2-     J. Natural Products. Volume 62, Number 10. October 1999. 1353-1357. 3-     J. Chromatog. 51  (1970) 327-329. 4-     J.  Ethnopharmacology  89 (2003) 73-80