ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA Y TOXICIDAD AGUDA DE UN GRUPO DE FENILPROPANOIDES

MASCOTTI,M; BISOGNO,F; KURINA SANZ,M; ENRIZ,D; GIANNINI,F

SAN LUIS ARGENTINA

Congreso; XXVI CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA; 2006

AQA

 Introduccion: El recrudecimiento en las infecciones fúngicas ha puesto en evidencia las falencias de los fármacos antifúngicos de uso en la actualidad; azoles y polienos, entre otros, han demostrado no ser lo suficientemente potentes y específicos para un tratamiento efectivo, presentando además serios problemas de toxicidad e incluso inducción de resistencia 1. Los fenilpropanoides, metabolitos secundarios de las plantas superiores, han demostrado tener potentes efectos antifungicos frente a gran cantidad de hongos2, incluso siendo mas activos que los mencionados azoles y polienos3.   En la búsqueda de nuevos compuestos con actividad antifúngica y menor toxicidad, hemos evaluado la actividad antifúngica y toxicidad de  una  serie de metabolitos estructuralmente relacionados con Drupanina (Figura 1), un compuesto con actividad antifúngica reportada4, metabolito mayoritario de Baccharis grisebachii  (Asteraceae) ampliamente distribuido en el centro oeste de Argentina.   Figura 1                         Metodología: Actividad antifungica: se realiza el test de Bioautografia5 que consiste en sembrar placas de TLC con  10mg de cada compuesto disueltos en acetona, control negativo (acetona) y control positivo (Miconazol). Se realiza una solución de agua peptonada al 1%, con 50 ml de Twin, se esteriliza en autoclave. Luego se agregan a dicha solución esporas de Aspergilus flavus, en una concentración del orden de 10 5 esporas/ml. La concentración de esporas en la solución se cuantifica utilizando el método de recuento leucocitario con cámara de Neubauer. Posteriormente se realiza una dilución de 1ml de esta solución en 9ml de medio de cultivo PDA. Se deposita en uno de los bordes de la TLC 1ml de esta solución y se realiza un extendido. Éstas se incuban en cámara húmeda durante 4 días. Se toman fotografías y se miden los halos de inhibición observados. Toxicidad aguda: El diseño y desarrollo de los test de toxicidad aguda se basa en una técnica experimental adaptada por nuestro grupo de trabajo de los tests utilizados  por U.S. Fish and Wildlife Service. Columbia National Fisheries Research Laboratory6 para evaluar toxicidad aguda de diversos compuestos químicos. La misma consiste en exponer  especimenes de peces (Poecilia reticulata) o anfibios (larvas de Buffo arenarum),  ante una solución de la droga en estudio a una determinada concentración, por un período de hasta 96 hs. En  ese lapso de tiempo, y manteniendo estandarizadas las condiciones de aireación, temperatura y reposición de agua, se mide el porcentaje de sobrevivientes; todo por duplicado y con un control negativo (sin droga alguna). En aquellos casos en los cuales la mortalidad es total (100 %) en ese lapso de tiempo,  se sigue evaluando a concentraciones inferiores para determinar cuantitativamente la toxicidad aguda de la droga en cuestión.     RESULTADOS Actividad Antifúngica: los resultados obtenidos se presentan en la Figura 1:   Figura 1: halos de inhibición obtenidos para los compuestos frente a Aspergillus flavus. Se consideran activos aquellos con halos igual o mayor a Miconazol (Control +).                                 Los resultados obtenidos presentaron al compuesto 8 con una actividad antifúngica significativamente mayor a la de la droga control + (Miconazol), también presentaron actividades interesantes los compuestos  4 y 9. Siendo la limitante de los compuestos antifungicos su toxicidad, en una segunda parte de este estudio realizamos ensayos de toxicidad aguda para todos los compuestos incluido Miconazol.     Toxicidad Aguda: los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 1:   Tabla 1: porcentajes de mortalidad en peces y anfibios para las drogas con actividad antifúngica. Droga Mortalidad en Peces a las 96 hs. Mortalidad en Anfibios a las 96 hs. 20 mg/l 10 mg/l 5 mg/l 2.5 mg/l 10 mg/l 5 mg/l 1 0 - - - 0 - 2 50 - - - 0 - 3 20 - - - 0 - 4 0 - - - 0 - 5 80 - - - 0 - 6 0 - - - 0 - 7 100 0 - - 0 - 8 0 - - - 0 - 9 100 0 - - 0 - 10 100 100 100 0 100 0