ROL REGULATORIO DE P21 SOBRE LA REPLICaCIÓN DE ADN DAÑADO

MANSILLA SF; SORIA G; SPERONI J; FEDERICO MB; GOTTIFREDI V

Mar del Plata

Congreso; LV REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

SAIC

Las lesiones producidas durante la duplicación del ADN pue- den producir bloqueos irreversibles en la horquilla de replicación y muerte celular. Para garantizar la continuidad de la replicación el proceso conocido como síntesis a través de lesiones (TLS-trans- lesion DNA synthesis) promueve un intercambio de polimerasas replicativas por polimerasas permisivas. Dichas polimerasas pue- den acomodar bases dañadas y usarlas como molde, garantizando así la continuidad de la replicación aunque con la potencialidad de aumentar la mutagénesis. Se han identificado diversas poli- merasas con especificidades distintas para cada tipo de lesión (por ej:, pol ç, especifica para dímeros de timidina), pero poco se sabe de su regulación. Nuestro grupo identificó a p21 como un regulador negativo del cargado de polç sobre ADN lesionado. Para establecer si p21 actúa como regulador negativo de TLS determinamos si su efecto se extendía a todas las polimerasas de TLS. Utilizamos mutantes estables de p21 que resisten la proteólisis inducida por irradiación UV y observamos que p21 inhibe el reclutamiento de otras polimerasas de TLS (pok, polé y REV1) al ADN lesionado. Esto se corroboró comparando cinéticas de reclutamiento de polimerasas en líneas celulares isogénicas HCT 116 p21-/- y p21+/+. El efecto negativo de p21 sobre la activación de TLS fué confirmado utilizando un novedoso ensayo (DNA Combing) que nos permite medir la progresión de horquillas de replicación individuales. Nuestros resultados sugieren que la asociación de p21 a horquillas de replicación activas podría inhibir el reclutamiento de polimerasas permisivas a la zona de daño. En conjunto, nuestros datos indican que los niveles basales inhiben la mutagénesis innecesaria asociada a la utilización de polimera- sas permisivas para la replicación de ADN intacto, mientras que la proteólisis de p21 inducida por luz UV promueve la gradual y correcta activación de TLS.