Caracterización parcial de proteasas tipo catepsina D durante la regresión ovárica en Dipetalogaster maxima, un vector de la enfermedad de Chagas

FRUTTERO L; CARLINI C; RUBIOLO E; CANAVOSO L

Huerta Grande, Córdoba

Jornada; XVII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2009

Sociedad de Biología de Córdoba

La regresión ovárica es un proceso gradual por el cual los insectos y otros animales ovíparos regulan el proceso vitelogénico en función de distintos factores ambientales y fisiológicos. En ese contexto, se ha postulado que las catepsinas, hidrolasas ácidas de origen lisosomal, son importantes para la degradación de los depósitos de vitelina. En este trabajo se analizó la actividad de diferentes enzimas tipo catepsinas (EC 3.4.22-23) en ovarios en regresión de Dipetalogaster maxima. Se utilizaron homogenatos de ovarios y los ensayos de actividad enzimática se realizaron empleando sustratos fluorogénicos específicos diseñados para catepsinas B, L y D. La caracterización de las enzimas implicadas se realizó con inhibidores específicos y mediante el análisis de los fragmentos producidos por espectrometría de masas (LC-ESI-QTOF). Se determinó la actividad de proteasas tipo catepsina D, lo cual fue confirmado por la inhibición por pepstatina A y el análisis de los fragmentos de clivaje. Se estableció que el rango de pH óptimo para la actividad fue de 3,5-4,0, estimándose una Km de 24,56 μM. Estos resultados representan un aporte al conocimiento de los eventos bioquímicos y fisiológicos que regulan la regresión ovárica en triatominos. [Apoyado por CONICET y SPU-CAPES].