Objetivo
Evaluar la mutagenicidad de los extractos deesporas de T. frezii en cultivos debacterias.
Materialesy Métodos
Se prepararon tres extractos de teliosporas conhexano (E-Hex), acetato de etilo (E-AcEt), y metanol (E-MeOH), a los fines deseparar los compuestos liposolubles, de polaridad intermedia, y los compuestosmás polares, respectivamente. Para esto se utilizaron teliosporas purificadas apartir de maní contaminado, cosechado en la campaña 2013-2014. Los extractos fueronevaporados a sequedad bajo corriente de nitrógeno, redisueltos endimetilsulfóxido (DMSO), esterilizados por filtración y conservados a 4 °Chasta su utilización.
La toxicidad de los extractos de teliosporas paralas cepas de Salmonella se estudió mediantela técnica del agar top inoculando en medios mínimos adicionados de nutrientes.
Test de Ames: Este ensayo de mutagenicidadtiene como objetivo determinar las alteraciones inducidas en el materialgenético de Salmonella typhimuriumpor distintos agentes físicos o químicos. Dichas alteraciones llevan amutaciones puntuales o corrimientos en el marco de lectura del ADN que pueden detectarse empleando las cepasTA100 y TA98, respectivamente. Además, debido a que es posible que unasustancia química no manifieste su mutagenicidad en forma directa sino a travésde sus metabolitos, se adicionó un sistema de metabolización ?in vitro? (S9),obtenido de hígado de rata pretratada con fenobarbital y ß-naftoflavona. Losensayos se realizaron utilizando diluciones decimales de los extractos, y elcriterio de positividad se basa en la comparación del número promedio decolonias revertientes que aparecen en las placas tratadas y en las placastestigo o control. Un producto será genotóxico si el número de colonias revertientesse incrementa al aumentar la concentración del mismo en el ensayo y si paraalguna de las concentraciones el número promedio de revertientes es por lomenos el doble que el detectado en las placas testigo o control.
En el estudio se utilizó 2-aminofluoreno comocontrol de la actividad microsomal y N-nitroso N´-nitro N-metilguanidina (MNNG)como control de la capacidad de reversión.
Resultadosy discusión
Los resultados obtenidos en el ensayo detoxicidad mostraron que las concentraciones evaluadas (100, 10 y 1 μL/placa) delos extractos de teliosporas (E-Hex, E-AcEt y E-MeOH) no produjeron efectostóxicos en las cepas TA98 y TA100 de S.typhimurium, y por lo tanto pueden ser utilizadas en el ensayo demutagenicidad.
En el Test de Ames, ninguna de lasconcentraciones estudiadas de los diferentes extractos de teliosporas (0 - μL/placa)incrementaron significativamente el número de colonias revertientes de S. typhimurium por placa con (+S9) y sin(-S9) el agregado de la fracción microsomal, respecto al número encontrado en lasplacas control o testigo. En general, la concentración 100 μL/placa de losdistintos extractos en presencia o ausencia del sistema de metabolizaciónindujo una ligera disminución en el número de colonias revertientes de ambascepas S. typhimurium detectadas encada placa y fue seleccionada como la concentración más alta a testear.
Los resultados obtenidos con el test de Amesse contraponen con los observados anteriormente mediante la técnica del cometaen CMB in vivo, por lo tanto esnecesario realizar otros estudios complementarios como la evaluación del dañocromosomal y la fragmentación del ADN en células eucariotas in vitro, que permitan concluiracerca de la acción genotóxica de las teliosporas.
Conclusiones
Los extractos metanólicos, con acetato deetilo y con hexano, de teliosporas no producen efectos mutagénicos en cultivosde Salmonella typhimurium. Lapresencia de un sistema de metabolización ?in vitro? no modifica la toxicidadgenética de los extractos estudiados.
Financiación: Elpresente trabajo fue financiado por Fundación Maní Argentino, PICT 2013-0750 y SECyT-UNC.Mary V.S. y Otaiza S.N. son becarios CONICET. Arias S.L. es becaria SECyT-UNC.Theumer M.G. es investigador de CONICET.
