ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DE CD147 EN LINFOCITOS B DURANTE SU MADURACIÓN NORMAL Y EN LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA POR INTERACCIÓN CON CÉLULAS DEL ESTROMA

RODRIGUEZ CM ,; GILARDONI, MB; REMEDI M; SASTRE D; DONADIO A C

MAR DEL PLATA

Congreso; XXII Congreso Argenttino de Hematologia; 2015

SOCIEDAD ARGENTINA DE HEMATOLOGIA

El microambiente medular juega un rol preponderante en la sobrevida y maduración del LiB. Las metaloproteinasas (MMP) como la (pro)MMP9 están involucradas en la migración y sobrevida de LiB en la Leucemia Linfática Crónica (LiB-LLC). LiB-LLC sintetizan proMMP9, la que se libera como proteína soluble y activa vías de señalización promoviendo la viabilidad de los LiB-LLC. CD147 es una glicoproteína de membrana que se expresa en la superficie de células hematopoyéticas, epiteliales, endoteliales, inmunes, fibroblastos (Fb) y células tumorales. CD147 puede estimular la producción MMPs en Fb y células endoteliales del microambiente, facilitando así el proceso de invasión de las células neoplásicas a los tejidos circundantes a través de la degradación de la matriz extracelular (MEC). El grado de glicosilación de esta proteína así como la agregación en superficie celular juega un rol clave en la inducción de MMPs. OBJETIVOS. Analizar la expresión de CD147 en linfocitos B durante su maduración medular y su regulación en LiB-LLC a través del contacto con Fb. MATERIALES Y MÉTODOS. Suspensiones de células de médula ósea de pacientes con aumento de precursores linfoides B (hematogonias) fueron analizadas por Citometría de Flujo (CF) con el siguiente panel de anticuerpos monoclonales: CD147-FITC/CD10-PE/ CD20-PERCP/CD19-APC y/o CD147-FITC/CD10-PE/CD45-PERCP/CD19-APC. Se analizó la Mediana de Intensidad de Fluorescencia (MIF) de CD147 en tres estadíos de células B (CD19+): Estadío 1 (E1): CD10hi, CD45lo, CD34+, CD20-(pre-B-I), Estadío 2 (E2): CD10 int/low, CD45int, CD34-, CD20+/- (Pre-B II células B inmaduras) y Estadío 3 (E3): CD10-, CD45hi, CD34-, CD20++ (células B maduras). Células mononucleares totales (CMT) de sangre periférica de 8 pacientes con LLC (47-78 años), fueron cultivadas en presencia (cocultivos) y ausencia de Fb normales (estado basal). Cambios en la expresión de CD147 en LiB-LLC cocultivados fueron evaluados por CF, Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) y Western Blot (WB). MMP9 fue evaluada mediante zimografías en sobrenadantes de cultivo. RESULTADOS. Se observó una disminución de la expresión de CD147 (MIF) durante la diferenciación linfoide B. La expresión de CD147 (MIF) en células en E1 es mayor (133,8 ±36,6; media ± SD) que lo obtenido en células en E2 (82,1 ± 51,1), siendo significativamente mayor que la expresión de CD147 en E3 (31,4 ± 17,4; E1 vs E3, p<0,05, ANOVA). CD147 en E3 tiene similar expresión que células B periféricas normales. Durante el cocultivo de LiB-LLC con Fb, se observó la aglutinación de estas células sobre los Fb. Los LiB-LLC mostraron un aumento en la expresión de CD147 post cocultivo, la que alcanzó una expresión significativamente mayor a las 48 hs con respecto a la expresión en condiciones basales. CD147 mostró un patrón de expresión en ?clusters? sobre la membrana plásmática en los LiB-LLC. En 4 de 6 pacientes analizados se observó un aumento de MMP9 en sobrenadantes de cultivos LiB-LLC-Fb respecto a LiB-LLC cultivados solos. CONCLUSIONES. La expresión de CD147 tendría un rol importante durante la maduración del linfocito B en relación a la inducción de señales de sobrevida y maduración en la célula B. La interacción del LiB-LLC con células del microambiente estromal aumentaría la expresión de la fracción glicosilada de CD147 lo que podría relacionarse con la producción de MMPs, degradación de MEC, invasión y sobrevida del clon neoplásico.