El mecanismo de catálisis enzimática de la oxidación de (-D-Glucosa a Glucono-*-Lactona, con la generación de peróxido de hidrógeno como producto secundario, ha sido ampliamente estudiado debido a su importancia en el control de la concentración de glucosa en sangre de pacientes diabéticos (1). La regeneración de la enzima se puede llevar a cabo utilizando mediadores redox los cuales permiten optar entre diferentes potenciales de detección, observándose además un incremento de la señal analítica, eliminación de interferentes, etc. La construcción de biosensores de glucosa oxidasa (GOx) adsorbida sobre superficies sólidas requiere la optimización tanto de parámetros analíticos, como de la interacción proteína superfície. El proceso de adsorción de la enzima en muchos casos induce cambios estructurales que finalmente se traducen en la pérdida total o parcial de la actividad enzimática. Estas modificaciones en la actividad enzimática definen la versatilidad de una determinada superficie para la construcción de biosensores.

En este trabajo, se estudió la cinética de adsorción-desorción de GOx sobre una superficie de sílica utilizando la técnica de reflectometría. Además, se realizaron estudios estructurales de la enzima adsorbida por FT-IR. La actividad de la GOx se determinó amperométricamente midiendo el peroxido de hidrógeno generado por la enzima en solución y adsorbida. También se utilizaron mediadores redox para determinar la actividad enzimática, ya que los cosubstratos de la familia de los ferrocenos generan buenas respuestas electroquímicas y permiten utilizar un potencial de trabajo alejado de la zona de desprendimiento de oxígeno. Los experimentos se realizaron en función del pH y de la fuerza iónica y se mantuvo constante la cantidad de enzima adsorbida.

Los resultados muestran que la adsorción de GOx sobre la superficie de sílica, perturba la estructura tridimensional de la proteína causando disminución de la actividad biológica. El seguimiento de la catálisis enzimática mediante la determinación directa de peróxido de hidrógeno o utilizando mediadores redox permite evaluar la influencia que tiene la superficie de sílica sobre el funcionamiento de los biosensores de glucosa.

Los autores agradecen a los siguientes organismos de la Argentina por el apoyo financiero recibido: SECyT-UNC, Agencia Córdoba Ciencia, Fundación Antorchas y CONICET.

1. Gibson, Q. H.,Swoboda, B. E. P. And Massey V., J. Bio. Chem., 239, 11 (1964). J. Bio. Chem., 239, 11 (1964).