GIACOMELLI CARLA EUGENIA
Congresos y reuniones científicas
Título:
Cuantificación de asparagina en cultivos celulares con electrodos composito de nanotubos de Carbono modificados con cobre
Autor/es:
M. LORENA LÓPEZ RODRIGUEZ; GUILLERMINA LUQUE; ROSSANA MADRID; CARMELO FELICE; NANCY FERREYRA; CARLA E. GIACOMELLI; GUSTAVO RIVAS
Lugar:
Bahia Blanca
Reunión:
Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009
Institución organizadora:
Asociacion Argentina de Quimicos Analiticos
Resumen:

Algunos medios de cultivo líquidosutilizadosfrecuentementeen cultivos celulares utilizan asparagina(Asp) y glucosa (Olu) como fuentesde nitrógeno (N) y de carbono (C), respectivamente [1]. En estudios de actividad de Streptomyces sp. M7 (SM7) realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como un interferenteya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimo líquido (MM)en presencia y en ausenciade la fuente de C.

El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamenteconsumeAsp tanto comofuente deN comode C. La determinaciónde Asp se efectuóamperoro,étricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modifIcados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatizaciónprevia [2].

Se realizaroncultivosde distintasconcentracionesinicialesde SM7 enMMcon Asp 3,33mMen presencia y ausenciade Glu a 30°C sin agitación.Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -180C hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por métodode Trinder [3].Parala cuantifiaciónde Aspresidualse empleó amperometríacon transporte convectivo controlado, aplicando O,OV(vs. Ag/ AgClI NaCI 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7M, preparada en MM, encontrándoseuna alta estabilidad y reproducibilidad.La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 :f:2,10) xlO-6AM-l, similar a la obtenida para soluciones de Asp preparadas en "buffer" fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 :f: 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72hpara todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glú es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentosanteriores [4].Los resultadospermitenconcluirque la  acteriaconsumeel aminoácidocomo fuente de N y de C. En consecuencia,para evaluar la actividad de la SM7 por impedancimetríase debería reemplazarla Asp por otra fuente de N.

Streptomyces sp. M7 (SM7) realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como un interferenteya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimo líquido (MM)en presencia y en ausenciade la fuente de C.

El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamenteconsumeAsp tanto comofuente deN comode C. La determinaciónde Asp se efectuóamperoro,étricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modifIcados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatizaciónprevia [2].

Se realizaroncultivosde distintasconcentracionesinicialesde SM7 enMMcon Asp 3,33mMen presencia y ausenciade Glu a 30°C sin agitación.Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -180C hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por métodode Trinder [3].Parala cuantifiaciónde Aspresidualse empleó amperometríacon transporte convectivo controlado, aplicando O,OV(vs. Ag/ AgClI NaCI 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7M, preparada en MM, encontrándoseuna alta estabilidad y reproducibilidad.La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 :f:2,10) xlO-6AM-l, similar a la obtenida para soluciones de Asp preparadas en "buffer" fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 :f: 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72hpara todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glú es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentosanteriores [4].Los resultadospermitenconcluirque la  acteriaconsumeel aminoácidocomo fuente de N y de C. En consecuencia,para evaluar la actividad de la SM7 por impedancimetríase debería reemplazarla Asp por otra fuente de N.

SM7 efectivamenteconsumeAsp tanto comofuente deN comode C. La determinaciónde Asp se efectuóamperoro,étricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modifIcados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatizaciónprevia [2].

Se realizaroncultivosde distintasconcentracionesinicialesde SM7 enMMcon Asp 3,33mMen presencia y ausenciade Glu a 30°C sin agitación.Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -180C hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por métodode Trinder [3].Parala cuantifiaciónde Aspresidualse empleó amperometríacon transporte convectivo controlado, aplicando O,OV(vs. Ag/ AgClI NaCI 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7M, preparada en MM, encontrándoseuna alta estabilidad y reproducibilidad.La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 :f:2,10) xlO-6AM-l, similar a la obtenida para soluciones de Asp preparadas en "buffer" fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 :f: 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72hpara todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glú es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentosanteriores [4].Los resultadospermitenconcluirque la  acteriaconsumeel aminoácidocomo fuente de N y de C. En consecuencia,para evaluar la actividad de la SM7 por impedancimetríase debería reemplazarla Asp por otra fuente de N.

SM7 enMMcon Asp 3,33mMen presencia y ausenciade Glu a 30°C sin agitación.Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -180C hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por métodode Trinder [3].Parala cuantifiaciónde Aspresidualse empleó amperometríacon transporte convectivo controlado, aplicando O,OV(vs. Ag/ AgClI NaCI 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7M, preparada en MM, encontrándoseuna alta estabilidad y reproducibilidad.La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 :f:2,10) xlO-6AM-l, similar a la obtenida para soluciones de Asp preparadas en "buffer" fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 :f: 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72hpara todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glú es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentosanteriores [4].Los resultadospermitenconcluirque la  acteriaconsumeel aminoácidocomo fuente de N y de C. En consecuencia,para evaluar la actividad de la SM7 por impedancimetríase debería reemplazarla Asp por otra fuente de N.