Propiedades in vitro de tubulinas modificadas por sustitución de la tirosina C-terminal de la subunidad α por análogos

BISIG, C.G.; CONTIN,M.A.; BARRA, H.S. Y ARCE, C.A.. 2000

Vina del Mar- Chile

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología molecular y Biología Celular; 2000

El COOH-Terminal de a-tubulina esta sometido a un ciclo de tirosinacion/detirosinacion por acción de  tubulina tirosina ligasa (incorporación) y tubulina carboxipeptidasa (remoción). El rol fisiológico de este ciclo es desconocido. Intentamos obtener tubulinas que en lugar de tirosina en el C-terminal tengan un análogo de esta. Esperamos que esta sustitución altere el comportamiento de la tubulina en cuanto a su aptitud para polimerizar y/o su habilidad como sustrato ante la tubulina carboxipeptidasa. Estas tubulinas modificadas podrán ser inyectadas en células para estudiar eventuales alteraciones en la fisiología celular ( organización microtubular, morfología, división celular, etc) que permitas sacar conclusiones respecto al rol que cumple el ciclo tirosinacion/detirosinacion. L-3.4-dihidroxifenilalanina (L-dopa) y 3-nitrotirosina (NO2 Tyr) fueron incorporadas en tubulina en en extractos solubles de cerebro. Se verifico que tanto NO2Tyr como L-dopa fueron realmente unidos a tubulina. Dopa no pudo ser removida de tubulina-dopa por accionde la tubulina carboxipeptidasa en condiciones en que Tyr es removida rápidamente. Carboxipeptidasa A pancreática si libero rápidamente la dopa. Por lo contrario, NO2Tyr solo pudo ser removida lenta y parcialmente por ambas enzimas, tubulina-dopa pudo formar microtúbulos in vitro mientras que tubulina-NO2 Tyr solo fue parcialmente apta. Resumiendo, ambos análogos se incorporan en tubulina y cambien las propiedades con respecto a tubulina tirosina normal y podrían ser usados para interferir el ciclo de tirosinacion/detirosinacion. También se generaron anticuerpos específicos contra las tubulinas modificadas.