La arginilación postraducción consiste en la unión covalente de arginina a un aminoácido acídico en la posición terminal NH2 de proteínas y es catalizada por la enzima R-transferasa. Previamente, hemos identificado varias proteínas solubles de cerebro de rata sustratos de esta modificación, entre ellas calreticulina (CRT). Esta proteína es sintetizada con un péptido hidrofóbico en su extremo amino terminal, el cual actúa como señal para la translocación cotraducción de la proteína al RE. En el RE este péptido se cliva, presentando un ácido aspártico en la posición terminal NH2. La incorporación ?in vitro? de arginina a CRT se efectúa sobre dicho aminoácido, conforme lo demuestran estudios de inmunotinción con un anticuerpo específico.
CRT es una proteína residente del RE, donde actúa como chaperona y almacenadora de calcio, por otra parte
En este trabajo estudiamos la arginilación de CRT en células en cultivo empleando un anticuerpo especifico para la forma arginilada de CRT (anti-RCRT). Cuando se analizaron extractos totales de células NIH 3T3 mediante la técnica de Western Blot, encontramos que el anticuerpo anti-RCRT reconoce una sola banda proteica cuya movilidad electroforética coincide con la de CRT, indicando que la arginilación de CRT no sólo se efectúa en las condiciones experimentales de los ensayos ?in vitro?, sino que también se lleva a cabo en células en cultivo.
Al estudiar la localización subcelular de CRT arginilada mediante inmunocitoquímica encontramos que la misma se encuentra asociada a estructuras de apariencia vesicular, que no colocalizan con marcadores de RE. Estos resultados sugieren que la arginilación de CRT se efectúa sobre un pool de esta proteína que no se encuentra en el RE, pudiendo ser un pool citosólico de CRT originado a partir de la retro-translocación desde el RE.
