El hipotiroidismo cong¨¦nito (HC) es el m¨¢s com¨²n de los trastornos metab¨®licos neonatales que afecta una proporci¨®n de 1:2.181 reci¨¦n nacidos en la provincia de C¨®rdoba, y de no ser tratado, puede dar lugar al deterioro grave del desarrollo neurol¨®gico. La disgenesia tiroidea es responsable del 60% de los casos mientras que el 40 % presenta alteraciones en la bios¨ªntesis o acci¨®n de las hormonas tiroideas.
El yodo es un componente esencial de las hormonas tiroideas, elementales reguladores del metabolismo intermedio, siendo fundamentales para el desarrollo del sistema nervioso central del reci¨¦n nacido. El programa de pesquisa neonatal de HC permite el diagn¨®stico temprano de esta enfermedad silente, en la que el tratamiento precoz es el ¨²nico medio que asegura una evoluci¨®n favorable.
Defectos en el transporte de yoduro (ITD) son des¨®rdenes autos¨®micos recesivos, causantes de HC debido a la incapacidad de la c¨¦lula tiroidea de almacenar yoduro, supuesto primer paso en la bios¨ªntesis de las hormonas tiroideas. El simportador de Na+/I- (NIS) es una glicoprote¨ªna integral de membrana altamente especializada en el transporte activo de yoduro hacia el interior celular. Hasta el momento han sido caracterizadas 12 mutaciones en NIS como causa de ITD.
El objetivo del presente trabajo ha sido analizar la presencia de mutaciones en el gen de NIS en pacientes con hipotiroidismo cong¨¦nito sospechados de presentar ITD.
Se estudiaron seis pacientes no relacionados con HC, detectados por pesquisa neonatal. Los criterios de inclusi¨®n fueron valores s¨¦ricos de TSH elevada y T4 disminuida, presencia ecogr¨¢fica de gl¨¢ndula tiroidea y centellograma tiroideo (captaci¨®n de pertecnetato, 99mTcO4-) negativo o claramente dismunu¨ªdo al momento de la confirmaci¨®n diagn¨®stica. En base a ello, se estableci¨® un grupo con captaci¨®n de 99mTcO4- menor al 1% (no captante, n=2) y un segundo grupo con valores de 1-10% (hipocaptante, n=4).
El ADN gen¨®mico fue extra¨ªdo de c¨¦lulas mononucleares de sangre perif¨¦rica, y fueron evaluados mediante amplificaci¨®n por PCR y posterior secuenciamiento los 15 exones que constituyen el gen de NIS, incluyendo las regiones no traducidas y uniones intr¨®n/ex¨®n.
Se determin¨® la presencia de una nueva transici¨®n homocigota C-T en un paciente hipocaptante ubicada dentro de la regi¨®n
La mutaci¨®n hallada se evalu¨® a nivel funcional con el prop¨®sito de comprender sus bases moleculares. Se construyeron vectores de expresi¨®n conteniendo la secuencia humana codificante de NIS salvaje (WT) y mutante (-54C¡úT), que fueron transfectados de forma estable en la l¨ªnea celular Cos-7. As¨ª, las c¨¦lulas transfectadas con la secuencia de NIS mutada concentraron 5-10% del nivel de yoduro acumulado por WT (captaci¨®n de 125yoduro), sugiriendo que la mutaci¨®n podr¨ªa ser causa directa de ITD. Los niveles de expresi¨®n proteica total de NIS, como los niveles en membrana, se observaron significativamente disminuidos en c¨¦lulas conteniendo la mutante, mientras que las WT mostraron una expresi¨®n total adecuada, y debidamente localizada en la membrana plasm¨¢tica. Sorprendentemente, los niveles de ARNm de NIS evaluados por RT/PCR en tiempo real fueron similares en las l¨ªneas celulares expresando la versi¨®n WT o -54C¡úT.
Puesto que la secuencia 5´UTR cumple un rol esencial en la estabilidad del ARNm y en la eficiencia de traducci¨®n, estos resultados sugirieron que la mutaci¨®n provocar¨ªa defectos a nivel traduccional. Por ello, analizamos el ARNm de NIS en el perfil polisomal aislado de c¨¦lulas Cos-7 estables. Compatible con una traducci¨®n activa, el ARNm de NIS WT se asoci¨® con la fracci¨®n polisomal, mientras que el proveniente de la mutante se observ¨® significativamente reducido en polisomas, consistente con una tasa de traducci¨®n y expresi¨®n proteica reducida.
En conclusi¨®n, describimos una nueva mutaci¨®n en el gen de NIS (-54C¡úT) como posible causa de HC. La evaluaci¨®n funcional del mecanismo molecular responsable de la alteraci¨®n en la capacidad de concentrar yoduro indicar¨ªa que la mutaci¨®n afecta el inicio de la traducci¨®n del ARNm de NIS, reduciendo dram¨¢ticamente su s¨ªntesis proteica. Adem¨¢s, nuestros resultados confirman la factibilidad de que alteraciones en prote¨ªnas relacionadas al plegamiento y tr¨¢fico de NIS a la membrana plasm¨¢tica podr¨ªan contribuir potencialmente al desarrollo de HC.
