MASINI ANA MARIA DE LAS MERCEDES
Congresos y reuniones científicas
Título:
Transporte y metabolismo de hormonas tiroideas en c¨¦lulas dendr¨ªticas: expresi¨®n de genes involucrados
Autor/es:
GIGENA NICOL¨¢S; ALAMINO VANINA A; NAZAR MAGAL¨ª; MONTESINOS MARIA DEL MAR; MASINI - REPISO ANA MARIA; CREMASCHI GRACIELA; PELLIZAS CLAUDIA G
Lugar:
Cordoba
Reunión:
Jornada; Jornada de Presentaci¨®n de Trabajos Cient¨ªficos de SEMCO; 2012
Institución organizadora:
Sociedad de Endocrinologia y Metabolismo de Cordoba (SEMCO)
Resumen:

Introducci¨®n y Objetivos: Los sistemas neuroend¨®crino e inmune operan de una manera bidireccional, en la cual hormonas y citoquinas representan los principales efectores de esta compleja interrelaci¨®n. Las c¨¦lulas dendr¨ªticas (DC) son c¨¦lulas presentadoras de ant¨ªgeno altamente especializadas que reconocen, procesan y presentan ant¨ªgenos a linfocitos T (Li T) v¨ªrgenes para inducir respuestas inmunes ant¨ªgeno (Ag)-espec¨ªficas. Las DC pueden ser obtenidas en el laboratorio a partir de m¨¦dula ¨®sea de rat¨®n (DC inmaduras¨CDCi) y maduradas (DCm) con lipopolisac¨¢rido (LPS). Las DCi poseen capacidad de captar y procesar Ag, a diferencia de las DCm que son capaces de liberar grandes cantidades de citoquinas, adquiriendo la capacidad de estimular a los Li T. En nuestro laboratorio demostramos que DC murinas expresan el receptor de hormonas tiroideas (HT) beta 1 (TR¦Â1) y que niveles fisiol¨®gicos de triiodotironina (T3) estimulan la maduraci¨®n de DCi y potencian su capacidad de estimular Li T, conduciendo a una respuesta de citoquinas tipo Th1 (Mascanfroni y col. FASEB J 2008, 22:1032). Estos efectos fueron ejercidos por T3 a trav¨¦s de una v¨ªa AKT y NF-kB dependiente (Mascanfroni y col. J Biol Chem 2010, 285: 9569). A su vez demostramos que los glucocorticoides son capaces de contrarrestar los efectos inmunoestimuladores de T3 en DC y de abolir su capacidad de polarizar la respuesta inmune adaptativa hacia un perfil Th1 (Montesinos y col. Steroids 2012, 77: 67). Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en el transporte y metabolismo de las HT en DC son desconocidos. Los objetivos de este trabajo fueron explorar: 1) la expresi¨®n de los 3 Transportadores de HT de mayor especificidad: Transportador de Monocarboxilatos 8 (MCT-8), MCT-10 y Transportador de Aniones y Polip¨¦ptidos Org¨¢nicos 1C1 (OATP1C1) en DC; 2) la expresi¨®n de Deiodinasas de Iodotironinas en DC: DIO 1, 2 y 3, en diferentes estad¨ªos de maduraci¨®n de DC, como as¨ª tambi¨¦n estudiar el potencial efecto de T3 sobre dicha expresi¨®n. Materiales y M¨¦todos: DCi fueron obtenidas de progenitores de m¨¦dula ¨®sea de ratones C57BL/6 y cultivadas en medio de cultivo RPMI 1640, en presencia de suero fetal bovino (10%) y factor estimulante de colonias macroc¨ªticas-granuloc¨ªticas (GM-CSF). Al cabo de 8 d¨ªas, m¨¢s de 85% de las c¨¦lulas expresan el marcador de superficie de DC: CD11c. Las DCi fueron maduradas con T3 (10 nM) o LPS (100 ng/ml) durante 18 hs. La presencia y los niveles de ARNm de los genes de inter¨¦s mencionados precedentemente fue evaluada semi-cuantitativamente a trav¨¦s de RT-PCR Convencional. Por su parte, mediante qRT-PCR en tiempo real (SYBR GREEN) se determin¨® la expresi¨®n relativa del ARNm de cada gen. La identidad de los genes de inter¨¦s fue confirmada mediante Nested RT-PCR o secuenciamiento gen¨¦tico. Resultados: 1) se evalu¨® la expresi¨®n de los 3 principales transportadores de HT (MCT-8, MCT-10 y OATP1C1). Los resultados mostraron que: A. DC expresan solamente ARNm de MCT-10, sugiriendo que la prote¨ªna que codifica funcionar¨ªa como transportador de HT facilitando su ingreso a la c¨¦lula; B. la expresi¨®n del ARNm de MCT-10 en DCi es menor que en DCm maduradas con est¨ªmulos como LPS y T3.  2) A. se evalu¨® la expresi¨®n de DIO 1, 2 y 3 en DC. Se evidenci¨® la presencia de ARNm tanto de Dio2 como de Dio3 en DCi, no as¨ª de Dio1; B. niveles fisiol¨®gicos de T3 regulan la expresi¨®n de DIO3 a nivel transcripcional incrementando los niveles de su ARNm. Discusi¨®n y Conclusiones: Los efectos de T3 sobre la maduraci¨®n y la funci¨®n de las DC fueron oportunamente reportados por nuestro laboratorio. Pero la manera en que T3 ingresa a la DC y la forma en la que sus niveles intracelulares son controlados, aun no hab¨ªan sido exploradas. En este trabajo demostramos la presencia de ARNm-MCT-10, sugiriendo que la prote¨ªna que codifica funcionar¨ªa como transportador de HT en DC. Por su parte, observamos expresi¨®n de ARNm-DIO2 y DIO3 en DCi pero no de DIO1, sugiriendo que DIO 2 y 3 participar¨ªan en la activaci¨®n-inactivaci¨®n de HT en el interior de las DC. En adici¨®n, demostramos que la HT activa: T3, participa de la regulaci¨®n de la expresi¨®n de DIO 3 a nivel transcripcional. Nuestros hallazgos proveen por primera vez evidencia de la presencia de los genes que est¨¢n involucrados en el transporte y metabolismo de las HT en DC, eventos cr¨ªticos para un adecuado mecanismo de acci¨®n de las mismas en esta c¨¦lula blanco, como ya fuera demostrado en nuestro laboratorio.