Identificación de una nueva mutación en la región carboxilo terminal del transportador de Sodio/Ioduro (NIS) en un paciente con hipotiroidismo congénito

NICOLA JP, TESTA G, SIGNORINO M, SOBRERO G, MUÑOZ L, MASINI - REPISO AM, MIRAS M.

Córdoba

Jornada; XVII Jornadas Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO); 2015

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO)

El defecto en el transporte de yoduro (ITD) es un trastorno autosómico recesivo causado por la incapacidad de la célula folicular tiroidea de acumular yoduro, conduciendo al desarrollo de hipotiroidismo congénito dishormonogénico. Los criterios diagnósticos incluyen glándula tiroides eutópica con grado variable de bocio, captación de yoduro reducida, relación saliva-plasma de yoduro reducida y tiroglobulina plasmática normal o aumentada. Sin embargo, el espectro clínico de los fenotipos resultantes varía desde cuadros eutiroideos hasta hipotiroidismos severos.La acumulación de yoduro constituye el primer paso en la síntesis de hormonas tiroideas. El transportador de sodio/yoduro (NIS) cataliza el transporte activo de yoduro. Defectos genéticos que conducen a la pérdida de función de NIS han sido identificados en pacientes con ITD. La caracterización molecular de diferentes mutantes de NIS ha permitido obtener información sobre los procesos que median la especificidad desustratos, la estequiometria del transporte y el tráfico de la proteína a la membrana plasmática.En el presente trabajo, hemos analizado la presencia de mutaciones en el gen que codifica NIS en un paciente pediátrico con hipotiroidismo congénito sospechado de ITD sobre la base de captación de 99mTc-pertecnectato severamente reducida y presencia de glándula tiroides eutópica. Mediante pesquisa neonatal se observó un nivel anormalmentealto de TSH (64 µIU/ml). El análisis bioquímico de la función tiroidea mostró TSH 203 µIU/ml, T4 libre 1,6 ng/dl, T4 total 8,7 µg/dl, T3 121 ng/dl y tiroglobulina 84 ng/ml. No se evidenciaron anticuerpos anti-tiroideos. La ecografía tiroidea mostró una glándula de tamaño normal. Se inició terapia de reemplazo con una dosis diaria de 14 μg/kg levotiroxina a los 10 días de vida.El ADN genómico fue extraído de células mononucleares de sangre periférica y los 15 exones del gen que codifica NIS fueron examinadas mediante el secuenciamiento de fragmentos amplificados por PCR. El análisis reveló la presencia de una transición homocigota G>A en el nucleótido 1.682 (exón 14) que resulta en la sustitución de la glicina en la posición 561 por un ácido glutámico (G561E). El estudio genético fue aprobado por el comité de ética del Hospital de Niños de la Santísima Trinidad de Córdoba y realiza bajo consentimiento informado por escrito de la familia del paciente. Se realizaron estudios in vitro con el fin de comprender las bases moleculares que conducen a la pérdida de la acumulación de yoduro en presencia de la mutación identificada. Células no polarizadas Cos-7 fueron transfectadas de forma transiente conplásmidos que expresan el ADN complementario de NIS humano (WT NIS) o la mutante G561E NIS. Sorprendentemente, células transfectadas con G561E NIS acumularon niveles similares de 125I-yoduro a aquellas transfectadas con WT NIS. El análisis mediante citometría de flujo demostró que el porcentaje de células transfectadas y los niveles de expresión de G561E NIS en la membrana plasmática y totales fueron similares a aquellos de WT NIS. La caracterización funcional de las mutantes de NIS identificadas en pacientes con ITD R124H, V270E y G543E demostró que el cambio de un único amino ácido causa la retención intracelular de NIS en células no polarizadas Cos-7. Aunque el mecanismo por el cual la mutación G561E impide la actividad de NIS permanece desconocida,hipotetizamos que la carga negativa del residuo G561 interferiría el reconocimiento delmotivo dileucina (L562L563) localizado en la región carboxilo terminal por proteínas adaptadoras que direccionan el tráfico intracelular de la proteína, afectando su llegada a la membrana plasmática basolateral en células epiteliales polarizadas. Estudios futuros evaluando la localización de G561E NIS en células polarizadas proveerá evidencia sobrelos mecanismos que operan en la regulación de la llegada de NIS a la membrana plasmática.