EVALUACIÓN DE SUPERÓXIDO DISMUTASA EN CÉLULAS PLANCTÓNICAS
Y BIOFILMS DE <i>Proteus mirabilis</i> SENSIBLES Y VARIANTES
RESISTENTES A CIPROFLOXACINA
Aiassa, V; Barnes, A I; Gauto, A; Altamira, A; Albesa, I.
Dpto. Farmacia. Fac. Ciencias Químicas. U.N.C. Ciudad Universitaria. CP 5000. Córdoba. Argentina. E-mail: aiassa@fcq.unc.edu.ar
Dpto. Farmacia. Fac. Ciencias Químicas. U.N.C. Ciudad Universitaria. CP 5000. Córdoba.
Argentina. E-mail: aiassa@fcq.unc.edu.ar
Barnes, A I; Gauto, A; Altamira, A; Albesa, I.Dpto. Farmacia. Fac. Ciencias Químicas. U.N.C. Ciudad Universitaria. CP 5000. Córdoba.
Argentina. E-mail: aiassa@fcq.unc.edu.ar
aiassa@fcq.unc.edu.ar<i>Proteus mirabilis</i> es un microorganismo frecuentemente aislado de infecciones
urinarias. La expresión de ciertos factores de virulencia como el swarming y estructuras
anatómicas como los flagelos participan en los procesos de colonización y desarrollo de la
enfermedad.
Frente a los antibióticos, las bacterias expresan su potencial capacidad de sobrevida
modificando aspectos del metabolismo. La superóxido dismutasa (SOD) es una
metaloproteína que protege a las células contra el estrés oxidativo mediante la dismutación
de dos moléculas de anión superóxido a peróxido de hidrógeno y agua, por tal motivo
merece ser investigada.
El objetivo de este trabajo fue obtener <i>P.mirabilis</i> resistentes a Ciprofloxacina (CIP)
y evaluar la producción de SOD en células planctónicas y biofilms en cepas wild type (wt)
y sus variantes resistentes (VR) a CIP .
Se estudiaron dos cepas de <i>P.mirabilis</i> wt (743 y 2909) a partir de las cuales se
seleccionaron cepas resistentes a CIP (743 X y 743S , 2909X y 2909S) mediante pasajes
sucesivos por concentraciones subinhibitorias del antimicrobiano (0,0625 mg/L) y
reaislamiento en Agar Müeller Hinton con concentraciones supra CIM de CIP (4 CIM y 6
CIM).
Los biofilms se formaron sobre membranas Millipore estériles inoculadas con 0,5 ml de un
cultivo overnight de <i>P.mirabilis</i> (DO600=0,200) y cultivadas en Agar Tripteína Soya
(ATS) por 24 h a 37ºC. La actividad SOD se determinó espectrofotométricamente utilizando Azul de Nitrotetrazolio (NBT) en presencia de riboflavina. Las CIM de las distintas cepas fueron: 743 y 2909: 0,125 mg/L; 743X: 4 mg/L; 743S:16 mg/L; 2909X: 8 mg/L y 2909S: 4 mg/L. La SOD intracelular (SODi) y extracelular (SODe) de las VR planctónicas aumentaron en promedio un 72 % y 42 % respecto a la wt, siendo el valor de la SODe aproximadamente el doble de la SODi. En el biofilm fue mas marcado el incremento de la SODe en relación a la SODi. También se observó aumento de SODe de biofilm comparado con la producción de SODe en planctónicas. Frente a CIP la respuesta de la actividad SOD fue variable en las distintas cepas. La presión selectiva que sufren los microorganismos con las distintas terapias antimicrobianas genera la selección de cepas resistentes. En este trabajo la exposición de <i>P.mirabilis</i> a CIP en concentraciones inferiores a la CIM permitió seleccionar VR a este antibiótico con distintos valores de CIM. Las cepas wt planctónicas y de biofilm mostraron una producción de SOD basal menor a las VR. En el biofilm se apreció un incremento significativo de la SODe respecto a las células planctónicas.
(ATS) por 24 h a 37ºC.
La actividad SOD se determinó espectrofotométricamente utilizando Azul de
Nitrotetrazolio (NBT) en presencia de riboflavina.
Las CIM de las distintas cepas fueron: 743 y 2909: 0,125 mg/L; 743X: 4 mg/L; 743S:16
mg/L; 2909X: 8 mg/L y 2909S: 4 mg/L.
La SOD intracelular (SODi) y extracelular (SODe) de las VR planctónicas aumentaron en
promedio un 72 % y 42 % respecto a la wt, siendo el valor de la SODe aproximadamente el
doble de la SODi. En el biofilm fue mas marcado el incremento de la SODe en relación a la
SODi. También se observó aumento de SODe de biofilm comparado con la producción de
SODe en planctónicas. Frente a CIP la respuesta de la actividad SOD fue variable en las
distintas cepas.
La presión selectiva que sufren los microorganismos con las distintas terapias
antimicrobianas genera la selección de cepas resistentes. En este trabajo la exposición de
<i>P.mirabilis</i> a CIP en concentraciones inferiores a la CIM permitió seleccionar VR a
este antibiótico con distintos valores de CIM.
Las cepas wt planctónicas y de biofilm mostraron una producción de SOD basal menor a
las VR. En el biofilm se apreció un incremento significativo de la SODe respecto a las
células planctónicas.
600=0,200) y cultivadas en Agar Tripteína Soya(ATS) por 24 h a 37ºC.
La actividad SOD se determinó espectrofotométricamente utilizando Azul de
Nitrotetrazolio (NBT) en presencia de riboflavina.
Las CIM de las distintas cepas fueron: 743 y 2909: 0,125 mg/L; 743X: 4 mg/L; 743S:16
mg/L; 2909X: 8 mg/L y 2909S: 4 mg/L.
La SOD intracelular (SODi) y extracelular (SODe) de las VR planctónicas aumentaron en
promedio un 72 % y 42 % respecto a la wt, siendo el valor de la SODe aproximadamente el
doble de la SODi. En el biofilm fue mas marcado el incremento de la SODe en relación a la
SODi. También se observó aumento de SODe de biofilm comparado con la producción de
SODe en planctónicas. Frente a CIP la respuesta de la actividad SOD fue variable en las
distintas cepas.
La presión selectiva que sufren los microorganismos con las distintas terapias
antimicrobianas genera la selección de cepas resistentes. En este trabajo la exposición de
<i>P.mirabilis</i> a CIP en concentraciones inferiores a la CIM permitió seleccionar VR a
este antibiótico con distintos valores de CIM.
Las cepas wt planctónicas y de biofilm mostraron una producción de SOD basal menor a
las VR. En el biofilm se apreció un incremento significativo de la SODe respecto a las
células planctónicas.
