Estudio de la capacidad sinergica de ciprofloxacina y norfloxacina por metodos microbiologicos y estres oxidativo
G. P. Vitorinoa, M. C. Becerrab, G. Barrerac, M.R.Mazzierib e I. Albesab.
aDpto. Farmacia, cDpto. Quimica, FCN, UNPSJB, Km. 4, (9000) Comodoro Rivadavia,
Chubut, Argentina.
bDpto. Farmacia, FCQ, UNC, Ciudad Universitaria, (5000) Cordoba, Argentina.
Email: gpv@quimica.unp.edu.ar
Las fluorquinolonas (FQ) son agentes antimicrobianos muy utilizados en terapeutica dado su amplio espectro de accion, buenas propiedades farmacocineticas y baja toxicidad. Actuan inhibiendo la ADN girasa en organismos Gram-negativos y la topoisomerasa IV en bacterias Gram-positivas.
Existen varias teorias que intentan explicar el modo de union de las FQs al complejo enzima-ADN. Con el objetivo de estudiar la factibilidad del mecanismo cooperativo descripto por Shen & col., se realizaron estudios microbiologicos que evaluan el comportamiento de combinaciones de ciprofloxacino (CIP) y norfloxacino (NOR).
Mediante el calculo de la concentracion inhibitoria fraccionaria (CIF) obtenida por el metodo del damero, el recuento bacteriano y medicion de la absorbancia a 625 nm en las curvas de muerte se evaluo el efecto de CIP y NOR combinadas frente a Staphylococcus aureus ATCC 29213 y Escherichia coli ATCC 25922. Ademas, se midio la capacidad de generacion de especies reactivas de oxigeno (ROS) utilizando el metodo de reduccion de Azul de Nitro Tetrazolio (NBT) de estas FQs solas y combinadas frente a S.aureus ATCC 29213 y a una cepa clinica resistente de S.aureus.
Los resultados encontrados por metodo del damero indicaron que las combinaciones 60 n/mL CIP + 60 ng/mL NOR y 1 ng/mL CIP + 30 ng/mL NOR presentaron sinergismo con valores de CIF 0.556 frente a S.aureus y CIF 0.661 frente a E.coli, respectivamente. El recuento bacteriano de la curva de muerte mostro actividad sinegica a las 5 h e indiferencia o aditividad a las 24 h frente a E.coli. Se observo indiferencia a las 24 h frente a S.aureus. El analisis de las pendientes generadas en los graficos de absorbancia en funcion del tiempo en el periodo 12 a 24 horas mostro que las combinaciones tienen efecto bacteriostatico frente a S.aureus.
La evaluacion de la capacidad de generacion de ROS evidencio que la combinacion 250 ng/mL CIP + 250 ng/mL NOR induce mayor efecto que las drogas solas tanto en S.aureus ATCC 29213 como en la cepa resistente. La combinacion 60 ng/mL CIP + 60 ng/mL NOR presento mayor efecto que el provocado por 500 ng/mL NOR frente a S.aureus ATCC 29213. En la cepa resistente se observo que la combinacion 500 ng/mL CIP + 500ng/mL NOR genero mayor efecto que cada una por separado.
Los resultados preliminares alcanzados hasta ahora mediante experiencias en el area microbiologica, no contradicen la teoria del mecanismo de accion de las FQs propuesto por Shen y col.
