Factores de Virulencia asociados a Escherichia coli
productor de toxina Shiga
Angel Villegas N1, Polifroni R2, Padola NL2, Pharma A2, Echeverría A2, Albesa I1, Becerra MC1, Paraje MG1.
Departamento de Farmacia. Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad del Centro de la provincia de Buenos Aires.
Introducción
Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno emergente transmitido por alimentos, que se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). En Argentina, el SUH post-entérico asociado a STEC es endémico y se producen aproximadamente de
La patogenicidad de las cepas de STEC parece estar asociada con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de la toxina Shiga (stx1, stx2). Las cepas de STEC además poseen otros como enterohemolisina (hly) e intimina (eae) y ambos se suman a la acción de la toxina que es el determinante de virulencia más importante para la patología del SUH. Un nuevo factor de virulencia podría ser la capacidad que posee STEC para formar biofilms, lo cual se encuentra menos caracterizado. Recientemente se ha descripto la capacidad de E.coli O157:H7 de formar biofilms en alimentos, acero inoxidable, vidrio o poliestireno. Entre los factores importantes para la formación del biofilms se pueden mencionar al flagelo o la fimbria tipo I “curli”; una proteína de superficie de estructura fibrilar que le permite a la bacteria adherirse a superficies sólidas vivas e inertes formando biofilms, permitiendo a las bacterias evadir los antibióticos y los mecanismos de defensa del sistema inmune.
objetivo
Determinar genotípica y fenotípicamente la presencia de distintos factores de virulencia en cepas productoras de toxina Shiga aislada de pacientes con SUH.
Material y Métodos
En este estudio se analizaron 8 cepas clínicas (7 E.coli O157:H7 y 1 O111:H-) provistas por Hospitales pediátricos de
Análisis Genotípico: La presencia de los genes que codifican para los factores de virulencia (stx1, stx2, hly, eae) y para la proteína curlina (csgD, csgA y crl) se estudiaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
Análisis Fenotípico: Mediante un Inmunoensayo óptico (OIA SHIGATOX) se estudió la expresión de las toxinas Shiga 1 y/o 2.
La expresión del curli se analizó mediante Rojo Congo.
La capacidad de formar biofilms de las cepas de E.coli se determinó mediante la adhesión a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloración con cristal violeta y elución con alcohol/acetona determinando la densidad óptica a 595 nm.
Resultados
Mediante el análisis genotípico se observó la presencia de los genes stx1, stx2, hly, eae, csgD, csgA y crl en todas las cepas estudiadas, excepto en
En cuanto al análisis fenotípico, todas las cepas fueron positivas para el estudio de la expresión de las toxinas y resultaron negativas para el análisis de la expresión del curli mediante la técnica del rojo congo, donde se visualizaron colonias lisas y rosadas.
Todas las cepas estudiadas fueron débiles formadoras de biofilms, presentando valores entre 0,1 y 0,2 de densidad óptica.
Conclusiones
Las cepas aisladas de pacientes con SUH presentaron la co-expresión de diversos factores de virulencia, tanto genotípica como fenotípicamente.
En cuanto a la capacidad de las cepas de formar biofilms, si bien se observó la presencia de los genes que codifican para la fimbria tipo I “curli”, no se obtuvieron las características colonias negras en el medio con rojo congo indicativas de la expresión de la proteína. Asociado a lo antes mencionado, todas las cepas en estudio mostraron una débil formación de biofilms in vitro.
