La tolerancia oral de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) con subunidad B de la toxina labil al calor de E. coli fusionada al dominio C de sinapsina (LTBSC) genera un aumento en la poblacion de ce¦lulas T CD4+CD25- Scerbo M. Julia, Bibolini Mario J., Roth German A., Monferran Clara G. CIQUIBIC ¨C Departamento de Quimica Biologica. Facultad de Ciencias Quimicas. Universidad Nacional de Cordoba. X5000HUA Cordoba. Argentina.
Se realizaron ensayos de tolerancia oral en ratas Wistar empleando la subunidad B de la toxina labil al calor de E. coli (LTB) fusionada al dominio C de sinapsina (LTBSC) (10 mg), una mezcla equimolar de LTB+SC o vehiculo administrados en 4 dosis antes de la induccion activa de la EAE con una emulsion de mielina en adyuvante de Freund completo. LTBSC produjo una disminucion en la incidencia de la EAE del 50 % (p<0,05) y en las alteraciones histopatologicas observadas en me¦dula espinal mientras que en el grupo de animales tratados con LTB+SC la disminucion de la incidencia fue del 20 %. Atento a que la aparicion de los signos clinicos y las lesiones histopatologicas en la EAE se asocia a la infiltracion del SNC por macrofagos y linfocitos T CD4+ autoreactivos productores de citocinas inflamatorias, se realizo la determinacion fenotipica de poblaciones celulares CD4+, CD4+CD25- y CD4+CD25+. Para ello se extrajeron los nodulos linfaticos mesentericos (NLM), ganglios linfaticos inguinales (GI) y bazo (B) de animales sacrificados el dia previo a la induccion activa de la EAE y durante el periodo agudo de la enfermedad. Los estudios fenotipicos se realizaron en las suspensiones celulares por citometria de flujo. Ademas en los animales inmunizados para inducir EAE se determinaron los niveles de IFN-gama e IL10 en sobrenadantes del cultivo de las suspensiones celulares. Los animales tratados con LTBSC previo al desafio para EAE mostraron un aumento con respecto al control en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ en NLM (p<0,01), GI (p<0,05) y B (p<0,05), mientras que los animales tratados con la mezcla LTB+SC mostraron un incremento en NLM (p<0,05) y GI (p<0,05). En los animales tolerizados con LTBSC y desafiados para la EAE se observo un aumento significativo en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ (p<0,001) y de IL-10 en los tres organos estudiados (p<0,01) con respecto al grupo control, mientras que los niveles de INF-gama disminuyeron excepto en NLM (p<0,05). En el grupo de animales tratados con LTB+SC el aumento en el porcentaje de la poblacion de celulas CD4+CD25+ e IL-10 fue menos marcado que en el grupo LTBSC, como asi tambien la disminucion de INF-gama en GI. Los resultados sugieren que LTBSC y en menor grado LTB+SC son capaces de inducir tolerancia periferica posiblemente a traves de un mecanismo de supresion activa con participacion de celulas T regulatorias CD4+CD25+.
Se realizaron ensayos de tolerancia oral en ratas Wistar empleando la subunidad B de la toxina labil al calor de E. coli (LTB) fusionada al dominio C de sinapsina (LTBSC) (10 mg), una mezcla equimolar de LTB+SC o vehiculo administrados en 4 dosis antes de la induccion activa de la EAE con una emulsion de mielina en adyuvante de Freund completo. LTBSC produjo una disminucion en la incidencia de la EAE del 50 % (p<0,05) y en las alteraciones histopatologicas observadas en me¦dula espinal mientras que en el grupo de animales tratados con LTB+SC la disminucion de la incidencia fue del 20 %. Atento a que la aparicion de los signos clinicos y las lesiones histopatologicas en la EAE se asocia a la infiltracion del SNC por macrofagos y linfocitos T CD4+ autoreactivos productores de citocinas inflamatorias, se realizo la determinacion fenotipica de poblaciones celulares CD4+, CD4+CD25- y CD4+CD25+. Para ello se extrajeron los nodulos linfaticos mesentericos (NLM), ganglios linfaticos inguinales (GI) y bazo (B) de animales sacrificados el dia previo a la induccion activa de la EAE y durante el periodo agudo de la enfermedad. Los estudios fenotipicos se realizaron en las suspensiones celulares por citometria de flujo. Ademas en los animales inmunizados para inducir EAE se determinaron los niveles de IFN-gama e IL10 en sobrenadantes del cultivo de las suspensiones celulares. Los animales tratados con LTBSC previo al desafio para EAE mostraron un aumento con respecto al control en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ en NLM (p<0,01), GI (p<0,05) y B (p<0,05), mientras que los animales tratados con la mezcla LTB+SC mostraron un incremento en NLM (p<0,05) y GI (p<0,05). En los animales tolerizados con LTBSC y desafiados para la EAE se observo un aumento significativo en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ (p<0,001) y de IL-10 en los tres organos estudiados (p<0,01) con respecto al grupo control, mientras que los niveles de INF-gama disminuyeron excepto en NLM (p<0,05). En el grupo de animales tratados con LTB+SC el aumento en el porcentaje de la poblacion de celulas CD4+CD25+ e IL-10 fue menos marcado que en el grupo LTBSC, como asi tambien la disminucion de INF-gama en GI. Los resultados sugieren que LTBSC y en menor grado LTB+SC son capaces de inducir tolerancia periferica posiblemente a traves de un mecanismo de supresion activa con participacion de celulas T regulatorias CD4+CD25+.
Se realizaron ensayos de tolerancia oral en ratas Wistar empleando la subunidad B de la toxina labil al calor de E. coli (LTB) fusionada al dominio C de sinapsina (LTBSC) (10 mg), una mezcla equimolar de LTB+SC o vehiculo administrados en 4 dosis antes de la induccion activa de la EAE con una emulsion de mielina en adyuvante de Freund completo. LTBSC produjo una disminucion en la incidencia de la EAE del 50 % (p<0,05) y en las alteraciones histopatologicas observadas en me¦dula espinal mientras que en el grupo de animales tratados con LTB+SC la disminucion de la incidencia fue del 20 %. Atento a que la aparicion de los signos clinicos y las lesiones histopatologicas en la EAE se asocia a la infiltracion del SNC por macrofagos y linfocitos T CD4+ autoreactivos productores de citocinas inflamatorias, se realizo la determinacion fenotipica de poblaciones celulares CD4+, CD4+CD25- y CD4+CD25+. Para ello se extrajeron los nodulos linfaticos mesentericos (NLM), ganglios linfaticos inguinales (GI) y bazo (B) de animales sacrificados el dia previo a la induccion activa de la EAE y durante el periodo agudo de la enfermedad. Los estudios fenotipicos se realizaron en las suspensiones celulares por citometria de flujo. Ademas en los animales inmunizados para inducir EAE se determinaron los niveles de IFN-gama e IL10 en sobrenadantes del cultivo de las suspensiones celulares. Los animales tratados con LTBSC previo al desafio para EAE mostraron un aumento con respecto al control en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ en NLM (p<0,01), GI (p<0,05) y B (p<0,05), mientras que los animales tratados con la mezcla LTB+SC mostraron un incremento en NLM (p<0,05) y GI (p<0,05). En los animales tolerizados con LTBSC y desafiados para la EAE se observo un aumento significativo en el porcentaje de celulas CD4+CD25+ (p<0,001) y de IL-10 en los tres organos estudiados (p<0,01) con respecto al grupo control, mientras que los niveles de INF-gama disminuyeron excepto en NLM (p<0,05). En el grupo de animales tratados con LTB+SC el aumento en el porcentaje de la poblacion de celulas CD4+CD25+ e IL-10 fue menos marcado que en el grupo LTBSC, como asi tambien la disminucion de INF-gama en GI. Los resultados sugieren que LTBSC y en menor grado LTB+SC son capaces de inducir tolerancia periferica posiblemente a traves de un mecanismo de supresion activa con participacion de celulas T regulatorias CD4+CD25+.
