Efectos antitumorales de la vitamina D3 y DL-butionina-S,R-sulfoximina en células intestinales neoplásicas malignas.

LIAUDAT AC; BOHL LP; TOLOSA DE TALAMONI NG; MALETTO, B; PISTORESI, MC; PICOTTO G

Buenos Aires

Congreso; XXVIII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto ?Ángel H. Roffo?.; 2012

El cáncer colorrectal es la segunda causa de muerte por tumores malignos en la República Argentina por lo que su tratamiento es tema de intenso estudio. La incidencia y el pronóstico de esta enfermedad están en estrecha relación con los niveles plasmáticos de 25(OH)D3, molécula precursora del 1,25(OH)2D3 (calcitriol), metabolito de mayor acción biológica de la vitamina D3. Por otro lado, el empleo de drogas oxidantes tales como D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumentan la sensibilidad de las células neoplásicas a los tratamientos. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferación de las células de cáncer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Las células Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM), BSO (2-500 μM), ambas drogas o vehículo a distintos tiempos de exposición. La viabilidad celular se determinó por la técnica violeta de cristal. La actividad de las enzimas del sistema antioxidante catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD), así como la de la enzima marcadora de diferenciación celular fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutatión (GSH) se midieron por espectrofotometría. La apoptosis se evaluó por las técnicas de TUNEL, tinción nuclear con DAPI y la externalización de fosfatidil serina. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometría de flujo. El proceso de autofagia se determinó por tinción con naranja de acridina y PCR en tiempo real (LC3). Los resultados se analizaron estadísticamente mediante el test de ANOVA a una vía seguido del test de Bonferroni como post-hoc (p< 0,05). Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron el crecimiento de las células Caco-2, efecto que resultó dependiente del tiempo y de la concentración de la droga utilizada. El contenido total de GSH disminuyó a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs la actividad de CAT aumentó solo con el tratamiento combinado mientras que la actividad SOD no se modificó. El potencial de membrana mitocondrial y la formación de autofagosomas incrementaron con el calcitriol y BSO+calcitriol. La actividad de FAL aumentó en las células tratadas con 1,25(OH)2D3 y con ambas drogas. El ciclo celular no se alteró con los distintos tratamientos. La fragmentación del ADN resultó positiva en células tratadas con BSO y BSO+calcitriol. En conclusión, BSO incrementa el efecto antiproliferativo del 1,25(OH)2D3 sobre las células Caco-2 mediante aumento del estrés oxidativo, el cual puede ser sólo parcialmente compensado por el sistema enzimático antioxidante. El incremento de FAL sugiere inducción de la diferenciación celular debida al calcitriol. La muerte celular de las células Caco-2 sobrevendría como resultado de la estimulación de autofagia y, aparentemente, la apoptosis no estaría involucrada.