Relación de los niveles de anticuerpos y del recuento de neutrófilos en líquidos sinoviales con la actividad de la enfermedad en pacientes con Artritis Reumatoidea. Rol de los complejos inmunes en el perfil migratorio de los neutrófilos

GORLINO, C; LACOSTE, M; CALDERON, M; FERNANDEZ, V; TAMASHIRO, H; BLAS, R; PISTORESI, MC; DI GENARO, S

Mar del Plata

Congreso; 46 Congreso Argentino de Reumatología; 2013

OBJETIVO: El reclutamiento de neutrófilos desde sangre a los sitios inflamatorios es un evento clave en la respuesta inmune; no obstante, la presencia de estas células en procesos inflamatorios crónicos, como es el caso de las enfermedades autoinmunes, puede ser patogénica. El objetivo de este estudio en pacientes con artritis reumatoidea fue determinar si la actividad de la enfermedad está relacionada con el influjo de neutrófilos en la sinovia y los niveles de anticuerpos en líquido sinovial, como así también comprobar in vitro si el perfil migratorio de los neutrófilos de sangre periférica se ve influenciado por la presencia de complejos inmunes. MATERIALES Y MÉTODOS: Se analizaron líquidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoidea (n= 29; 75% mujeres; edad media: 53 años) en los que se determinó la actividad de la enfermedad por el cálculo del índice DAS-28. El número de neutrófilos se determinó por recuento diferencial mediante tinción con May-Grünwald Giemsa mientras que los niveles de anticuerpos anti-proteínas citrulinadas y los de Inmunoglobulina G total se determinaron por ensayos de ELISA e inmunodifusión radial, respectivamente. En los experimentos de estimulación in vitro con complejos inmunes, se utilizaron neutrófilos de sangre periférica de sujetos sanos y complejos inmunes formados por Inmunoglobulina G agregada por calor. El análisis del fenotipo de los neutrófilos y de su perfil migratorio se realizó mediante la marcación con anticuerpos anti-CD15, anti-CD16, anti-L-selectina, anti-CD11b, anti-CXCR2, anti-CXCR3 y anti-CD54 y su posterior determinación por citometría de flujo. Para el análisis estadístico se utilizaron las pruebas T de Student y correlación de Spearman. Todas las diferencias fueron consideradas como estadísticamente significativas cuando p<0,05. RESULTADOS: Los ensayos realizados en los líquidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoidea mostraron que el número de neutrófilos correlacionó en forma positiva con el valor de DAS-28 (p<0,05). Además, la relación anticuerpos anti-proteínas citrulinadas/ Inmunoglobulina G (UI/mg por ml de líquido sinovial) fue significativamente mayor en pacientes con mayor actividad de la enfermedad (DAS-28 ˃3,7; p<0,05). Paralelamente, en los ensayos de estimulación in vitro de neutrófilos de sangre periférica con complejos inmunes se comprobó la presencia mayoritaria de una subpoblación de neutrófilos fenotípicamente distintiva (CD16 highL-selectina low). Cuando se analizó la expresión de las diferentes moléculas migratorias, esta subpoblación presentó una menor expresión del receptor de quimiocina CXCR2 mientras que aumentó la del receptor CXCR3 y la de la molécula CD54 comparándola con la subpoblación de neutrófilos sin estimular (CD16 highCD62L high ; p˂0,01). CONCLUSIÓN: Los resultados aquí presentados demuestran que en pacientes con artritis reumatoidea la actividad de la enfermedad se relaciona con el número de neutrófilos como así también con la relación anticuerpos anti-proteínas citrulinadas/ Inmunoglobulina G presente en el líquido sinovial. A su vez, la estimulación in vitro de los neutrófilos con complejos inmunes demostró regular el perfil de expresión de diferentes moléculas involucradas en la migración. Futuros estudios nos permitirán corroborar lo observado in vitro en líquidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoidea