Obtención de Antígenos del Virus Linfotrópico de Células T Humanas tipo 1
(HTLV-1) por delipidación
Britos Manriquez Lucas1, Gomez Lucía1, Balangero Marcos1, Pistoresi, Cristina2,
Institución de autor principal: 1- Instituto de Virología, FCM, UNC.
Instituciones autores secundarios: 2-CIBICI-CONICET, FCQ, UNC. 3- Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular. FCM. UCC.
Introducción
Una de las principales dificultades para la obtención de vacunas contra virus envueltos ha sido los cambios conformacionales en los epitopes antigénicos producidos en el proceso de extracción de la envoltura por los métodos tradicionales utilizados para la obtención de los antígenos virales. Se ha descrito recientemente un método muy eficiente de inactivación y obtención de antígenos del virus de
Objetivo: Obtener mediante delipidación concentrados de virus HTLV-1 inactivado, manteniendo la conformación de los epitopes antigénicos, para ser utilizados como inmunógenos en la producción de anticuerpos monoclonales neutralizantes.
Materiales y métodos: El concentrado de virus HTLV-1 se obtuvo por ultracentrifugación del sobrenadante de las células MT-2 utilizando un colchón de sacarosa al 20% siguiendo los protocolos descritos por Feng 2001 y Sun 2002 con algunas modificaciones. Partiendo de este concentrado de virus se realizó la delipidación en agitación continua durante una hora con una mezcla de solventes diisopropileter-butanol, y se extrajo la fase acuosa según el protocolo descrito por Cham 2006 con algunas modificaciones. Para comprobar la efectividad de la inactivación viral, se infectaron líneas celulares EL-4 con el virus delipidado por 24 horas (Feng 2001) y se amplificaron las secuencias del DNA viral mediante una Nested-PCR in house (Vandamme 1997). Además se realizó un Western blot in house para comprobar si las proteínas resultantes eran reconocidas por anticuerpos policlonales específicos contra el virus.
Resultados: A partir de los cultivos celulares no se amplificaron secuencias de DNA viral por la técnica de Nested-PCR in house. Con el ensayo de Western blot se comprobó que las proteínas virales conservaban la reactividad frente a un suero policlonal positivo anti-HTLV-1.
Discusión: La técnica de delipidación del virus HTLV-1 permitió la obtención de un inoculo inactivo cuyos antígenos mantienen la reactividad frente a un suero policlonal positivo anti-HTLV-1. Otros autores han descrito la generación de anticuerpos monoclonales anti-HTLV-1 por inoculación de ratones con células productivamente infectadas con HTLV-1 (Tanaka, 1994), proteínas recombinantes o péptidos sintéticos (Sundaram, 2004; Mirsaliotis, 2007). Algunos de estos métodos no logran obtener la estructura conformacional de las proteínas virales que sirven de antígenos, lo que implica una pérdida neta de antigenicidad. Se conoce que los péptidos que imitan la estructura nativa de las proteínas antigénicas virales, generan una respuesta de anticuerpos de mayor afinidad con potencial neutralizante que la inmunización por estrategias convencionales con péptidos sintéticos (Sundaram, 2004). Como perspectiva futura es necesario evaluar in vivo la inmunogenicidad del concentrado de HTLV-1 delipidado. La técnica de delipidación viral es económica y permite obtener un inoculo viral inactivado que puede ser utilizado en forma segura para protocolos de inmunización.