Sinergismo entre alcaloides de Phlegmariurus saururus en la inhibición de acetilcolinesterasa

MACIAS C; VALLEJO M; BIRRI M; ORTEGA G; AGNESE M

Córdoba

Congreso; 47° Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2015

SAFE

Phlegmariurus saururus (Lam.) B. Øllg. [ex Huperzia saururus (Lam.) Trevis.] (Lycopodiaceae) es una especie autóctona argentina usada en la medicina popular como mejoradora de la memoria. En estudios previos identificamos 10 alcaloides y determinamos la acción inhibitoria sobre acetilcolinesterasa (AChE) de sauroína (sr, inactiva), sauroxina (sx), 6-hidroxilycopodina (6OH) y N-demetilsauroxina (Ndsx). Debido a que ninguno de ellos posee una acción tan potente como la del extracto alcaloidal purificado de P. saururus (PSEA, CI50 0.58 μg/mL), el objetivo del presente trabajo fue determinar si existe un efecto sinérgico entre los alcaloides.Se usó el método de Ellman adaptado para la medición en un lector ELISA, empleando salicilato de fisostigmina (CI50 0,005 μg/mL) como control positivo. Primero, se evaluó la actividad de PSEA con esta técnica luego de 30 min de incubación con la enzima (t=30). Posteriormente, se establecieron las proporciones relativas de los alcaloides en el PSEA, calculando sus concentraciones de acuerdo al cromatograma obtenido por CGL-EM y así fueron ensayados por su actividad, de igual forma que el extracto. Se prepararon luego soluciones de las combinaciones (dos a cuatro alcaloides), respetando sus proporciones en el extracto con el fin de comparar la inhibición de AChE de los compuestos solos y en presencia de uno o más del resto. Para el cálculo de las inhibiciones, se empleó el programa InStat 3.01 y se determinaron las DE.Se obtuvieron los siguientes resultados: sx= 5,85±0,85 %; sr= 0%; 6OH= 0%; Ndsx= 0%; sx+sr##= 11,46±2,45; sx+6OH*,$ = 17,96±3,60; sx+Ndsx= 7,86±2,76; Ndsx+6OH$,&&= 15,27±4,63; sr+6OH##,$= 19,10±3,08; sr+ Ndsx#,&= 9,44±1,67; sx+6OH+Ndsx*, $,&&= 23,44±3,06; sx+6OH+Ndsx+sr*,##, $, &&= 25,18±0,92. *= significativamente diferente de sx, p<0,001; #= significativamente diferente de sr, p<0,01; ##=p<0,001; $= significativamente diferente de 6OH, p<0,001; &= significativamente diferente de Ndsx, p<0,01; &&=p<0,001.Con estos estudios, se ha producido un avance en la investigación de sustancias naturales con actividad nootrópica. Los resultados aquí alcanzados reflejan un importante incremento en la inhibición cuando se combinan dos o más alcaloides, contrastado con la escasa o nula actividad que ellos ejercieron en forma individual, a las bajas proporciones en la que se los encuentra en el PSEA. De este modo, se ha demostrado por primera vez la existencia de un efecto sinérgico entre los alcaloides estudiados, poniendo en evidencia la importancia del extracto natural. Nuevas investigaciones serán desarrolladas con los restantes alcaloides aislados.