En nuestro laboratorio, reportamos que cruzipaína (Cz), sin actividad enzimática, induce en la cepa C57BL/6 (B6) un perfil de citoquinas Th1 y la activación clásica de macrófagos, mecanismo que controla la infección parasitaria. Teniendo en cuenta que la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), puede participar en el control de la infección y que receptores de la inmunidad innata como los TLRs, son claves en la respuesta inmune hacia parásitos, estudiamos si Cz es capaz de inducir la expresión de TLR2 y/o TLR4 además del estallido respiratorio de células totales de bazo (CTB). Se utilizaron 3 grupos de ratones B6; GI, inmunizados con 10 ug de Cz+CFA; GC, inmunizados con OVA+CFA y GN, normales. Por citometría de flujo se observó un incremento en el porcentaje de esplenocitos TLR2+ en el GI luego de la estimulación con Cz vs medio 27 ± 2 % vs 15 ± 2 % respectivamente (p < 0.05). El GI también mostró un aumento en el porcentaje de células F4/80+ TLR2+ luego de la estimulación con Cz 83 ± 1 % vs medio 57 ± 4 (p < 0.05). Por Western blot se reveló un incremento de este receptor a las 24 h post cultivo mientras que la expresión de TLR4 no sufrió cambios significativos en los tiempos estudiados.
Por otra parte, el estudio de la producción de ROS mediante la técnica de luminol reveló que Cz agregada en forma exógena es capaz de inducir el estallido respiratorio en CTB obtenidas en fresco en los 3 grupos de ratones (unidades relativas de luz (URL) basal GN: 3.23 ± 0.45; GI: 9.58 ± 1.5; GC: 6.81 ± 1.62; URL post estimulación Cz N: 24.65 ± 2.01; C: 28.23 1.73; I: 31.41 ± 2.28). Con una nueva estimulación con Cz de 2 h, se produjo un aumento en las URL (relación entre URL de CTB+CZ/ CTB+medio). La misma fue para GI: 8,3 y para GC: 6,6. Más aún, La incubación de las células con superoxido dismutasa, catalasa, L-NMMA disminuyó la intensidad del estallido respiratorio inducido por Cz, mientras que la incubación con tirón- escavenger del anión superoxido- lo neutralizó totalmente.
Resumiendo, Cz un principal componente del T. cruzi, induce la producción de ROS en CTB de inmunes, controles y normales. Además favorece tanto la expresión de TLR2 y número de esplenocitos que lo expresan, sugiriendo que este receptor podría ser un eslabón entre la inmunidad innata y la inmunidad adaptativa y potenciar el estallido respiratorio como mecanismo de defensa innato.
