Estudio de parámetros bioquímicos y clínicos asociados al metabolismo de hidratos de carbono, lípidos e injuria hepática-vascular en un modelo experimental de obesidad y en pacientes obesos

CABALEN ME; MALACALZA P; PONCE MG; CABRAL MF; ANDRADA MC; GEA S; CANO RC

Córdoba

Otro; REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD DE ENDOCRINOLOGÍA DE CÓRDOBA; 2012

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba

Introducción: La obesidad es considerada la pandemia del siglo XXI y entre sus comorbilidades, el Síndrome Metabólico (SM), la Diabetes Mellitus tipo 2 (DM 2) y la enfermedad cardiovascular(ECV), son causas importantes de morbi-mortalidad en occidente (OMS). El concepto del tejido adiposo (TA) como órgano de reserva de energía, ha experimentado un cambio paradigmático y se lo considera un órgano endócrino activo y con propiedades inmunológicas. Numerosos estudios básicos se han realizado en modelos experimentales de obesidad en ratones manipulados genéticamente. Sin embargo, son escasos los antecedentes bibliográficos en modelos murinos salvajes, inducidos por administración de dieta grasa así como también su asociación con esteatosis hepática y ECV ateroesclérótica. La ateroesclerosis, una patología compleja, multifactorial y dinámica, es vista como una inflamación crónica de la pared arterial (Ross, 1999) y recientemente, se demostró la participación de receptores tipo Toll (TLRs) y otros mediadores inflamatorios del TA, en la genésis/progresión de la patología cardiovascular. Objetivo: Se desarrolló un modelo experimental inducido por dieta grasa/fructosa en ratones C57BL/6 (B6), con la finalidad de investigar el posible mecanismo responsable de la inducción de inflamación crónica de grado bajo, esteatosis hepática y su impacto sobre las lesiones arteriales. En paralelo, se realizó un estudio retrospectivo de corte transversal, en pacientes obesos para analizar las alteraciones bioquímicas y clínicas, en comparación con pacientes normales. Material y Métodos: Modelo Experimental: se usaron ratones B6 machos (2 meses de edad), divididos al azar en 2 grupos: basales (B) alimentados con dieta estándar rata/ratón (3% de lípidos) y dieta (DIO) que recibieron dieta grasa (13% de lípidos/fructosa al 5% en H20 de bebida) y una dosis no-diabetogénica de estreptozotocina. Los estudios abarcaron desde el tiempo 0 hasta 3 meses (m), con registro del peso corporal (PC). Con 12h de ayuno, se determinaron en plasma: 1) triglicéridos (TG) y colesterol (CT)(métodos enzimáticos-colorimétricos); 2) insulina basal (RIA) y glucosa (método enzimático-colorimétrico) y se calculó el índice HOMA-IR; 3) Determinación de transaminasa ALT (cinética-UV); 4) Electroforesis de proteínas séricas en agarosa. 5) Histología: se obtuvieron muestras de corazón, hígado y arteria torácico-abdominal para coloración con hematoxilina-eosina. 6) Expresión proteica de TLR2 y 4 por inmunofluorescencia directa, con anticuerpos específicos unidos a fluorocromos. Pacientes: Se incluyeron 18 pacientes obesos de ambos sexos (40-70 años) y 20 controles normales (C) de edades similares, concurrentes al Laboratorio Central del Sanatorio Allende de Córdoba. Criterios de exclusión: DM2, patologías tiroideas u otras endocrinopatías con aumento del peso corporal (PC) o en tratamiento con fármacos para reducir el PC. En plasma, se evaluaron los mismos parámetros bioquímicos y clínicos, analizados en el modelo experimental. Con el PC (Kg) y la altura (m2) se calculó el Indice de Masa Corporal (IMC). Análisis Estadístico: Los datos se analizaron empleando el test T de Student o ANOVA de una vía y como prueba post hoc el test de Tukey. p <0.05 se consideró estadísticamente significativa. Resultados: Modelo Experimental: Los ratones DIO mostraron un aumento significativo del PC versus (vs) B durante el tiempo de tratamiento, con un 75% de incremento a los 3m, que correlacionó con aumento del TA visceral. En DIO, a 1 y 3m, la insulina basal aumentó (n= 5, p<0.01 vs B) sin cambios significativos en la glucosa. El HOMA-IR fue 6 y 19 veces superior a los B, a 1 y 3m respectivamente. En DIO a 1 y 3 m, se observó un aumento significativo de TG (p<0.01 vs B), a expensas de aumento de VLDL y caída de HDL, mientras que, a partir de los 2 m, se observó un perfil con CT y TG aumentados, compatible con dislipemia mixta. La expresión de TLR2 y 4 estuvo aumentada en corazón e hígado de ratones DIO vs B. En ambos tejidos se demostró presencia de grasa ectópica y en arteria gotas de lípidos subendoteliales e hipertrofia de células adiposas periadventiciales con aumento de infiltrado inflamatorio. Los ratones DIO mostraron esteatohepatitis marcada a los 3 m, sin alteraciones del funcionalismo hepático. La esteatosis hepática fue incipiente en DIO 1m, y progresó con el tiempo, resultando muy severa macro/microvesicular (mixta), con infiltrado inflamatorio leve y ausencia de cambios funcionales hepáticos, en ratones DIO a los 3m. Pacientes: El grupo de pacientes obesos mostró niveles aumentados de glucosa en ayunas vs los C, p<0.03, hiperinsulinemia, p<0.015 y aumento del HOMA-IR p<0.0001 vs C. El análisis de los lípidos permitió demostrar un aumento de TG (mayor a los 200 mg.dl-1) y una disminución significativa del colesterol HDL en pacientes obesos vs B. El CT y el colesterol LDL mostraron aumentos vs los C, p<0.002 y p<.004 respectivamente, compatible con dislipemia mixta. La esteatosis observada por birrefringencia en el diagnóstico ecográfico, sería de tipo simple, ya que la actividad de ALT no permitió evidenciar alteraciones del funcionalismo y/o daño hepático, al momento del estudio. Los parámetros analizados en estos pacientes, correlacionaron con un IMC superior a 30 Kg/m2, indicando que el grupo en estudio serían obesos tipo I (OMS). Conclusiones: Los hallazgos demostraron que ratones DIO desarrollan obesidad, IR y dislipemia compatible con SM y aumento del riesgo cardiovascular. Resultados similares se encontraron en la muestra de pacientes obesos tipo I. Las alteraciones se acompañaron con una esteatosis severa en el modelo experimental y simple en obesos humanos, pero no hubo alteraciones del funcionalismo/injuria hepática. Los ratones DIO mostraron un aumento de expresión de TLR2 y 4 en hígado y el perfil de proteínas, caracterizado por incremento de las fracciones α 1 y 2 globulínicas a nivel sistémico, indicaría un proceso inflamatorio agudo vs B. Este conjunto de factores compatibles con la inducción de SM, demostradas en el modelo experimental descripto, podría explicar la aparición de lesiones tempranas de ateroesclerosis en humanos.