ESTUDIO DEL POLIMORFISMO DEL GEN DE TNF-, DE DICHA CITOCINA, Y DE MCP-1 EN PACIENTES CON QUERATOPATÍA CLIMÁTICA ESFEROIDEA

SERRA HM; SUAREZ MARÍA F; GARCÍA ORO MC; ESPOSITO E; CAFARO TA; MONTI R; URRETS-ZAVALIA JA

Congreso; XXXVI CONGRESO ANUAL AAAeIC; 2013

Objetivo: Investigar polimorfismo de nucleótidos únicos (SNP) en la posición -308 (G/A) del gen TNF- y la participación de las citocinas TNF- y MCP-1 en pacientes con queratopatía climática esferoidea (QCE) y en controles sanos. Materiales y Métodos: En esta investigación participaron 15 pacientes con QCE y 15 individuos sanos del Departamento El Cuy, Provincia de Río Negro. Todos ellos, luego de firmar el consentimiento informado, recibieron un examen oftalmológico completo y se recolectaron muestras de sangre y lágrima para realizar diferentes estudios. EL ADN genómico fue obtenido de sangre de todos los individuos mediante el método de ?Salting out? y posteriormente amplificado y estudiado realizando el método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con el sistema de amplificación refractaria a la mutación (ARMS). También se investigaron concentraciones de algunas citocinas pro-inflamatorias en lágrimas y en sobrenadante de cultivo de células epiteliales corneales humanas (CECH) tratadas o no con radiación ultravioleta B (RUV-B). Resultados: Los resultados de SNP en la posición -308 (G/A) del gen TNF- (frecuencia alélica y genotípica) indicaron ausencia de diferencias significativas entre pacientes y controles sanos. Fenotipicamente ambos grupos de individuos serían bajos o intermedios productores in vitro de la citocina TNF-. Sin embargo en las lágrimas de pacientes con QCE se detectaron concentraciones significativamente superiores de TNF-, IL-1β y MCP-1 (citocinas pro inflamatorias) que en lágrimas de individuos controles sanos (p<0,0001) En la periferia y limbo de la cornea las células dendríticas (CDs) incrementaron significativamente con el progreso de la enfermedad (p<0,05). La contribución del epitelio corneal en el proceso inflamatorio fue investigada utilizando CECH expuestas o no a 10mJ / cm2 de RUV-B. A pesar de la presencia de gelatinasas, IL-6 e IL-8 en sobrenadantes de cultivos obtenidos a las 48 horas (datos no mostrados) no observamos niveles detectables de TNF-, IL-1β ni MCP-1. Conclusión: Este trabajo de investigación aporta nuevos datos para aumentar los conocimientos sobre los mecanismos inmunológicos involucrados en la etiopatogénesis y progresión de la QCE. Demostramos que las citocinas pro-inflamatoria MCP-1 y TNF- se observan significativamente elevadas en lágrimas de individuos con QCE, como fue previamente observado con IL-1β. MCP-1 sería la responsable del aumento de CDs en cornea periférica y limbo de estos pacientes a medida de que la enfermedad avanza. El hallazgo de que estas citocinas no pudieron ser detectadas en cultivos de CECH estresadas con RUV-B implica que otras células son las responsables de su producción o que además de RUV-B otros factores son necesarios para iniciar esta cascada de eventos que se observan en esta hipersensibilidad corneal humana.