Estimación de la Lipofilicidad de Nuevos Fotosensibilizadores por RP-HPLC

MONTES DE OCA, JIMENA VARA Y CRISTINA S. ORTIZ

Congreso; XXVIII Congreso Argentino de Química y 4to. Workshop de Química Medicinal; 2010

Estimación de la Lipofilicidad de Nuevos Fotosensibilizadores por RP-HPLC(TFD) es una modalidad terapéutica especialmente aplicada para el tratamiento de tumores e infecciones ocasionadas por microorganismos, siendo un aspecto importante el análisis de las correlaciones entre propiedades químicas y biológicas de los fotosensibilizadores. Las características relevantes que influyen en la eficacia de estas drogas son la lipofilicidad, solubilidad, producción de oxígeno singlete y localización intracelular entre otras.Por lo tanto, el valor de log P, definido como el logaritmo del coeficiente de partición entre n-octanol y agua, es un parámetro importante que refleja la hidrofobicidad de un compuesto y en muchas instancias se correlaciona con la actividad biológica de las diferentes drogas. La determinación del coeficiente de partición utilizando el método de la ampolla es considerado el método de referencia si bien posee varias desventajas.  Es por esto que se han desarrollado métodos alternativos, los cuales incluyen la cromatografía líquida de alta eficiencia de fase reversa (RP-HPLC) y la cromatografía en placa delgada de fase reversa (RP-TLC).

El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una metodología analítica que permitiera determinar las propiedades lipofílicas de nuevos agentes fotosensibilizadores derivados de Triarilmetanos y Tiazinas utilizando la técnica de HPLC, cuyas ventajas más destacables son la velocidad de determinación, la reproducibilidad y la pureza de las muestras.

Se utilizó un cromatógrafo líquido Agilent 1100 Series y una columna SUPELCOSIL LC-18, 5µm; 250mm×4,6mm (SUPELCO, Sigma-Aldrich) y como fase móvil metanol-solución de trietilamina fosfato (TEAP) 40mM pH 5,5 (70-90% de metanol, incrementos de 5%). Se determinó el tiempo de retención tanto de las sustancias de referencia (estructuralmente análogos) como de los compuestos problema siendo t₀ el tiempo de retención del solvente orgánico. El factor de capacidad, se obtuvo a partir del valor de t₀ y los tiempos de retención de los solutos, según la siguiente ecuación:

k?=(t_R- t₀)/ t₀

De los gráficos de log k? versus el porcentaje de metanol en las distintas fases móviles se determinó la ordenada al origen, es decir, el factor de capacidad de todas las sustancias de referencia a 0% de metanol (log k?_w). Los derivados tiazínicos presentaron un mecanismo de retención dual, con gráficos en forma de V.

Este comportamiento es debido a las denominadas interacciones silanofílicas entre los solutos y los sitios silanoles residuales de la fase estacionaria. La posición del mínimo en la representación gráfica depende del pH de la fase móvil y por lo tanto de la proporción de moléculas de soluto protonado que pueden participar en interacciones silanofílicas.

Luego se relacionaron los valores de log k?_w con los de log P obtenidos de literatura (método de la ampolla).

log P = 1,274(± 0,123) log k?_w ? 0,553(± 0,329)

n=11; R²= 0,91424; F= 107,598

Se pudo observar que existe una buena correlación entre los datos, por lo cual se utilizó dicha ecuación para determinar los valores de log P_HPLC de los nuevos fotosensibilizadores.

A partir de la metodología desarrollada se estimaron correctamente los coeficientes de partición de los colorantes de interés. Además, se observó un incremento notable de la lipofilicidad de estos compuestos a medida que se incrementa la sustitución por átomos de bromo en las diferentes moléculas.