Desarrollo de una Metodología Analítica por HPLC para la Evaluación de New Fuchsin Comercial?

MONTES DE OCA, M. N., URRUTIA M. N. Y ORTIZ, C

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial-SAFyBI; 2007

Desarrollo de una metodología analítica por HPLC para la evaluación de New Fuchsin comercial. la Terapia Fotodinámica" la Terapia Fotodinámica (PDT) está ocupando un lugar preponderante como herramienta valiosa capaz de inducir la destrucción específica de las células tumorales. Esta terapia generar efectos fototóxicos en sistemas biológicos, entendiendo por fotosensitizador a toda droga que, siendo absorbida selectivamente por células anormales y expuesta a la luz, la misma se transforma en una especie activa, produciendo el fotodaño deseado y la muerte celular. El desarrollo de nuevos fotosensitizadores capaces de inducir sólo la destrucción de las células tumorales, constituyen un tema de interés, por lo cual se ha seleccionado al New Fuchsin (NF), que pertenece a la familia de los triarilmetanos, como precursor para el desarrollo de nuevos derivados. Comercialmente, este colorante es una combinación de NF, Magenta II y Magenta I. Estos análogos difieren sólo en el número de grupos metilos unidos en la posición orto al sustituyente amino de los anillos aromáticos, teniendo tres, dos y un grupo metilo en cada anillo, respectivamente.

Por lo tanto, el objetivo específico del presente trabajo es el desarrollo de una metodología apropiada por Cromatografía Líquida de Alta Presión (HPLC) que permita identificar los componentes y evaluar el grado de pureza de una muestra comercial de NF.

El análisis se desarrolló en un cromatógrafo Agilent 1100 Series con inyector automático y bomba isocrática. La detección UV/Vis se realizó a 280 y 550nm.

Las columnas cromatográficas utilizadas en el estudio fueron: (1) Merck, Lichrosorb Hibar RP-C18; 4 x 250mm de 10 µm, (2) MICRO PAK, mCH~5 N cap; 4 x 150mm de 5 µm y (3) SUPELCO INC, Waters Spherisorb ODS 2; 4,6 x 250mm de 5 µm.

Las fases móviles empleadas fueron una combinación de Acetonitrilo (Grado HPLC) y una solución acuosa de Cloruro de Amonio en diferentes concentraciones.

La adición del electrolito Cloruro de Amonio a los sistemas de fase móvil favoreció enormemente la elusión de estos colorantes. Se observó una disminución en los tiempos de retención de los diferentes componentes a medida que se incrementa la concentración del reactivo iónico (disminución del pH). Esto se explica debido al carácter iónico de los grupos silanoles de la superficie de la fase estacionaria, ya que una disminución del grado de ionización de estos grupos polares como consecuencia de la disminución del pH, puede someter a los analitos iónicos a menores fuerzas de atracción y por lo tanto disminuir su retención. También se observó una disminución en los tiempos de retención de estos colorantes a medida que decrece la proporción de agua, como consecuencia de una disminución de la tensión superficial de la Fase Móvil (FM). De este análisis, se concluyó que una mezcla de Acetonitrilo:solución acuosa de Cloruro de Amonio 50mM 90:10 fue óptima como FM.

Las resoluciones cromatográficas obtenidas para las diferentes columnas evaluadas, utilizando como Fase Móvil la mencionada anteriormente, fueron las siguientes: para (1) R=1,53±0,01; (2) R=1,01±0,03 y para (3) R=2,77±0,01.

El método desarrollado por HPLC, utilizando la FM Acetonitrilo: solución acuosa de Cloruro de Amonio 50mM 90:10 y las columnas (1) y (3) permitió la separación e identificación de las mezclas de estos colorantes con una muy buena resolución (mayor a 1,5), siendo apropiada para la estimación de los porcentajes de pureza y la cuantificación de cada componente.