DETERMINACIÓN DEL MECANISMO DE INACTIVACIÓN FOTODINÁMICA DE AGENTES FOTOTÓXICOS FRENTE A Staphylococcus aureus

URRUTIA M, ALOVERO F, ORTIZ C

Córdoba

Congreso; VI Congreso Iberoamericano de Ciencias Farmacéuticas y III Congreso Sudamericano de Biofarmacia y Farmacocinética. Córdoba. Argentina 2015.; 2015

Coiffa

Ante el creciente desarrollo de resistencia a agentes antimicrobianos, la Inactivación Fotodinámica (IFD) ha sido propuesta como una alternativa terapéutica de elevada eficacia para el tratamiento de infecciones localizadas. Neutral Red monobromado (NRBr) es un nuevo compuesto sintetizado a partir de Neutral Red (NR), que exhibe propiedades adecuadas para un fotosensibilizador (FS). Previamente, se demostró que NRBr produce mayor fotoinactivación de S. aureus en comparación con el reactivo de partida. En este trabajo se presentan estudios sobre el mecanismo de IFD de NRBr frente a S. aureus, evaluando simultáneamente NR. Suspensiones de S. aureus ATCC 25923 (~105 UFC/mL) en buffer fosfato salino (PBS; pH 7,4) fueron tratadas con ambos FS (25 µM) en presencia de manitol (atrapador de radicales) ó azida de sodio (atrapador de radicales libres y desactivante de oxígeno singlete) e irradiadas con luz visible durante 15 y 30 min para NRBr y NR, respectivamente. Se procesaron cultivos controles expuestos a los diversos tratamientos sin irradiar. Sucesivas diluciones en PBS se sembraron por duplicado en agar Müeller-Hinton. Los recuentos se realizaron luego de incubar 18-24 h a 37ºC. Se promediaron resultados de 2 experimentos independientes, comparando las medias con la prueba de t de Student desapareada dos colas (P<0,05 fueron significativos).Cultivos expuestos a manitol y azida de sodio en ausencia de FS no exhibieron disminución significativa del recuento en relación al control, tanto en oscuridad como con posterioridad a la irradiación.Los resultados de la evaluación mecanística de NR frente a S.aureus mostraron que manitol ejerce un efecto protectivo luego de la irradiación, al no exhibir reducción del inóculo. Por su parte, azida de sodio también demostró inhibición de la fotoinactivación producida por este FS, sin diferencias significativas con manitol (mecanismo Tipo I).La evaluación de NRBr también evidenció un efecto protectivo de los microorganismos con la adición de manitol, determinando que actúa mediante mecanismo Tipo I. Sin embargo, debido a que el efecto evidenciado es parcial (disminución significativa ~1 log10 UFC/mL), NRBr actuaría mediante una combinación de ambos mecanismos, Tipo I y Tipo II. Aunque azida de sodio ejerce efecto protectivo de la fotoinactivación de S.aureus, este fue incompleto y menor que el exhibido por manitol. La particularidad de este comportamiento, podría explicarse según publicaciones recientes que describen la generación de radicales azidilos altamente reactivos a partir de azida de sodio, los cuales podrían contribuir a la muerte bacteriana.Por lo tanto, en este trabajo se determinó que NR es productor de especies radicalarias, actuando mediante mecanismo Tipo I, en tanto que NRBr lo haría mediante una combinación de los mecanismos Tipo I y Tipo II.