NANOESTRUCTURA FORMADA POR EL AUTOENSAMBLAJE DE PALMITATO DE ASCORBILO INCREMENTA EL EFECTO ADYUVANTE DEL LIGANDO SINTÉTICO DE TLR9 ES SU UTILIZACIÓN COMO VACUNA.

CHIODETTI, ANA LAURA; SÁNCHEZ VALLECILLO, MARÍA FERNANDA; CRESPO, MARÍA INES; MORÓN, GABRIEL; PALMA, SANTIAGO; PISTORESI, MARÍA CRISTINA; ALLEMANDI, DANIEL ALBERTO; MALETTO, BELKYS ANGÉLICA.

Encuentro; Escuela de Nanomedicina. Asociación Argentina de Nanomedicina.; 2014

Introducción: Las vacunas de la nueva generación (vacunas a subunidades) se basan en antígenos altamente purificados o recombinantes por lo cual es imperativo incluir adyuvantes en la formulación de este tipo de vacunas. Cuando estos inmunógenos se administran con los adyuvantes aprobados para uso humano, inducen una respuesta inmune celular débil. Por lo tanto, existe un gran interés en desarrollar nuevas estrategias adyuvantes. Los oligodeoxinucleótidos sintéticos que contienen motivos CpG no metilados en un contexto particular de bases (CpG-ODN) son inmunoestimulantes que están siendo utilizados con éxito como adyuvante en ensayos clínicos de fase I y III, pero los mismos poseen una biodisponibilidad reducida lo que limita severamente el potencial que tienen para ser utilizado ampliamente en la clínica. El CpG-ODN es un ligando sintético del receptor de la respuesta innata TLR9 que se caracteriza por inducir un perfil de respuesta celular de tipo Th1. En este trabajo, nosotros evaluamos la actividad adyuvante de CpG-ODN formulado en una nanoestructuta derivado de 6-0-palmitato de ascorbilo (Coa-ASC16). Estos estudios se realizaron en un modelo murino (cepa C57BL/6) donde se utilizó la proteína ovoalbumina (OVA) como antígeno modelo. Resultados: Con el objetivo de analizar la capacidad de CpG-ODN formulado en Coa-ASC16 para inducir una respuesta celular de linfocitos T CD8+ citotóxicos (CTL) realizamos un ensayo de citotoxicidad in vivo. Los CTL son células efectoras que cumplen un rol clave en la inmunidad contra patógenos intracelulares y cáncer. Para ello, se inmunizaron ratones C57BL/6 vía subcutánea con OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 u OVA/CpG-ODN en los días 0,7 y 14 (dosis/ratón OVA: 60µg, CpG-ODN: 75µg). Al día 21, los ratones inmunizados con OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 presentaron un mayor porcentaje de lisis celular específica de antígeno que los ratones inmunizados con OVA/CpG-ODN (79±6% vs 16±6%, p<0.02). Al mismo tiempo, se cuantificó IFN-γ (una citoquina producida por los CTL) por ELISA en los sobrenadantes provenientes de esplenocitos re-estímulo in vitro por 72hs con el péptido de OVA257?264 restricto a MHC-I. Los esplenocitos provenientes de animales inmunizados con OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 secretaron mayores niveles de IFN-γ que los inmunizados con OVA/CpG-ODN (p<0,05). Para evaluar la respuesta inmune humoral inducida por esta formulación se realizó una cinética de los niveles de IgG anti-OVA en suero. Para ello, se inmunizaron animales vía subcutánea en el día 0 con OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 u OVA/CpG-ODN (dosis/ratón OVA: 60µg, CpG-ODN: 75µg). Se obtuvo el plasma en los días 8, 10, 13, 16, 19, 22, 35, 49 y 65 post inmunización para el análisis por ELISA de los títulos de IgG OVA-específica. Al día 8, el plasma de ambos grupos fue no reactivo. Al día 10, sólo el grupo de animales inmunizados con OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 generaron una respuesta de IgG OVA-específica (2.1±0.2 vs no detectado). Después del día 10, el grupo OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 produjo mayores títulos de IgG OVA-específica que el grupo OVA/CpG-ODN (p<0,001). Conclusión: Nuestros resultados indican que esta plataforma basada en una nanoestructura de palmitato de ascorbilo incrementa la eficiencia en la generación de una respuesta CTL y acelera la seroconversión generando la rápida producción de anticuerpos antígeno específicos. Por lo tanto, esta nueva estrategia adyuvante demuestra un gran potencial para su uso como nuevo adyuvante vacunal.