El ARN de simple hebra (ARNsh) activa las c¨¦lulas dendr¨ªticas (DCs) murinas a trav¨¦s de TLR7. Previamente demostramos que BMDCs estimuladas con ligandos de TLR7 aumentan su capacidad de realizar presentaci¨®n cruzada de ant¨ªgenos (Ag) ex¨®genos in vitro. Se usaron tres agonistas de TLR7: Poly U, Imiquimod y Gardiquimod. Para estudiar si ¨¦stos pueden estimular la presentaci¨®n cruzada en DCs espl¨¦nicas se realiz¨® un estudio de presentaci¨®n in vitro utilizando el hibridoma de c¨¦lulas T CD8+ B3Z, espec¨ªfico para OVA257-264. DCs purificadas de bazo de ratones C57BL/6 incubadas con ovalb¨²mina en forma de complejos inmunes en presencia de Gardiquimod produjo un aumento en la presentaci¨®n de OVA (hasta 25 veces, p<0,05) con respecto a las DCs sin est¨ªmulo.
Para evaluar el efecto de los ligandos de TLR7 en el desarrollo de una respuesta espec¨ªfica, se realiz¨® un ensayo de inducci¨®n de citotoxicidad in vivo. Ratones C57BL/6 fueron inmunizados con perlas de l¨¢tex unidas a OVA (perOVA) junto a Poly U estabilizado con DOTAP. Luego de 7 d¨ªas, los animales fueron inyectados con c¨¦lulas blanco marcadas con CFSE. Los animales que fueron inmunizados con Poly U presentaron (98,0¡À0,6)% de lisis espec¨ªfica (p<0,05). Estos resultados se correlacionan con la secreci¨®n de IFN-¦Ã por esplenocitos reestimulados in vitro. Para analizar la participaci¨®n de c¨¦lulas T CD4+ en la inducci¨®n de respuesta citot¨®xica, se inmunizaron ratones en las mismas condiciones descriptas, depletados de estas c¨¦lulas por inyecciones i.p. con anticuerpo antiCD4 (clon GK1.5). Como control se utilizaron ratones inyectados i.p. con IgG. Por citometr¨ªa de flujo observamos, 0% de c¨¦lulas CD3+ CD4+ en los animales depletados. Estos animales depletados presentaron una menor lisis espec¨ªfica que los animales controles (p<0,05). Cuando se reestimularon los esplenocitos in vitro no se observ¨® secreci¨®n de IFN-¦Ã en los animales depletados, confirmando la necesidad de linfocitos T CD4+ para la inducci¨®n de linfocitos T CD8+ citot¨®xicos (CTLs). Para evaluar si la inducci¨®n de CTLs podr¨ªa ser resultado de la estimulaci¨®n in vivo de DCs, se inmunizaron animales con DCs espl¨¦nicas estimuladas con Poly U/DOTAP + perOVA; 7 d¨ªas post-inmunizaci¨®n se observ¨® 62% de lisis espec¨ªfica, indicando la inducci¨®n de CTLs espec¨ªficos.
Estos resultados muestras que los ligandos de TLR7 utilizados tienen capacidad adyuvante sobre la activaci¨®n de linfocitos T CD8+, mediante la estimulaci¨®n de DCs y la cooperaci¨®n de linfocitos T CD4+.
