La inhibición de la glutaminasa modifica el patrón de o-glicosilación y el flujo a través de la ruta de las hexosaminas en células tumorales

TOSINA MARTA; DONADIO ANA CAROLINA; LOBO ]CAROLINA; CAMPOS-SANDOVAL JOSE ANGEL; MATES JUAN MANUEL; MARQUEZ JAVIER; ALONSO FRANCISCO; SEGURA JUAN ANTONIO

Congreso; XXX Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular; 2007

Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular

La glutamina actúa como nutriente esencial en células tumorales, así como en células con alta proliferación. La principal enzima responsable de catalizar la hidrólisis de glutamina a glutamato es la glutaminasa, cuya actividad se relaciona directamente con el consumo de glutamina y la velocidad de crecimiento celular. Hemos trabajado con células de tumor de mama MCF7, células de tumor ascítico de Ehrlich EATC y líneas celulares derivadas de éstas en las que se inhibió la expresión de glutaminasa mediante el uso de la tecnología antisentido, denominadas ORF19 y 028AS-2 respectivamente. Hemos estudiado el efecto de la inhibición de glutaminasa sobre la ruta de las hexosaminas, la cual tiene glutamina como sustrato. La actividad de la enzima glutamina:fructosa-6-P amidotransferasa (GFAT), la cual constituye el principal punto de control de velocidad de esta ruta, se vio disminuida en un 80% en las líneas ORF19 y 028AS-2 respecto de las parentales. Se analizaron los niveles relativos de mRNA de GFAT mediante PCR cuantitativa, sin encontrar diferencia significativa entre las líneas parentales y sus derivadas antisentido. Esto sugiere que la diferencia en actividad se debe a regulaciones post-transcripcionales. La inhibición de la actividad GFAT supone una reducción en la cantidad de UDP-GlcNAc, producto de la ruta de las hexosaminas y principal sustrato de la O-glicosilación. Hemos encontrado proteínas con un estado de O-glicosilación alterado en células ORF19 y 028AS-2 respecto de las parentales, como la O-GlcNAc transferasa, enzima que transfiere los grupos N-acetilglucosamina a las proteínas. Por rastreo de geles 2-D hemos encontrado dos proteínas diferencialmente O-glicosiladas en las líneas ORF19 y 028AS-2, TCP-1 y
Ets-related proteins.