FIDELIO GERARDO DANIEL
Congresos y reuniones científicas
Título:
Aspectos termodinámicos y estructurales del proceso de dimerización de la proteína lactoglobulina
Autor/es:
BURGOS I.,; DASSIE SA,; FIDELIO G.D.
Lugar:
SALTA, ARGENTINA.
Reunión:
Congreso; XVI Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Físicoquímica
Resumen:
ß -lactoglobulina es una proteína pequeña, globular y compacta la cual, en
solución, está en equilibrio con su forma dimérica. Éste equilibrio puede ser desplazadopor cambios en la concentración total de proteína, temperatura y pH. En soluciones de pHneutro la forma predominante es el dímero. En este trabajo se estudió, por diferentes técnicas, la formación del monómero de ß -lactoglobulina a partir del dímero, a pH = 6.7, inducida por aumento de la temperatura. Se realizaron experimentos de calorimetría diferencial de barrido (DSC) a distintas concentraciones de proteína y se observó que los termogramas de ß -lactoglobulina a pH = 6.7 son bifásicos y que la transición que ocurre amenor temperatura muestra una dependencia con la concentración total de proteína. Amedida que la concentración aumenta la primera transición ocurre a temperaturas másaltas mientras que la temperatura media de la segunda transición ocurre a 78 ºC de formaindependiente de la concentración de proteína. Este resultado permitió plantear un
mecanismo que implica la disociación del dímero en una primera instancia y la posteriordesnaturalización del monómero. De acuerdo al modelo termodinámico de disociación de un dímero propuesto en un trabajo anterior (1), se pudo determinar, mediante simulaciones de perfiles calorimétricos, que sólo un dímero con entalpía de dimerizaciónnegativa presenta la dependencia con la concentración de proteína observada en losexperimentos. Mediante experimentos de calorimetría de titulación isotérmica (ITC) se
obtuvieron los parámetros de dimerización de beta- lactoglobulina y se determinó que la dimerización es un proceso exotérmico, en coincidencia con lo predicho por el modelo.
Por otro lado, la disociación de ß -lactoglobulina inducida por temperatura fue monitoreadaempleando espectroscopia de absorción en el infrarrojo (FTIR) y dicroísmo circular (CD) yse pudo determinar que ocurren cambios estructurales asociados al proceso de disociación del dímero a pH = 6.7.
solución, está en equilibrio con su forma dimérica. Éste equilibrio puede ser desplazadopor cambios en la concentración total de proteína, temperatura y pH. En soluciones de pHneutro la forma predominante es el dímero. En este trabajo se estudió, por diferentes técnicas, la formación del monómero de ß -lactoglobulina a partir del dímero, a pH = 6.7, inducida por aumento de la temperatura. Se realizaron experimentos de calorimetría diferencial de barrido (DSC) a distintas concentraciones de proteína y se observó que los termogramas de ß -lactoglobulina a pH = 6.7 son bifásicos y que la transición que ocurre amenor temperatura muestra una dependencia con la concentración total de proteína. Amedida que la concentración aumenta la primera transición ocurre a temperaturas másaltas mientras que la temperatura media de la segunda transición ocurre a 78 ºC de formaindependiente de la concentración de proteína. Este resultado permitió plantear un
mecanismo que implica la disociación del dímero en una primera instancia y la posteriordesnaturalización del monómero. De acuerdo al modelo termodinámico de disociación de un dímero propuesto en un trabajo anterior (1), se pudo determinar, mediante simulaciones de perfiles calorimétricos, que sólo un dímero con entalpía de dimerizaciónnegativa presenta la dependencia con la concentración de proteína observada en losexperimentos. Mediante experimentos de calorimetría de titulación isotérmica (ITC) se
obtuvieron los parámetros de dimerización de beta- lactoglobulina y se determinó que la dimerización es un proceso exotérmico, en coincidencia con lo predicho por el modelo.
Por otro lado, la disociación de ß -lactoglobulina inducida por temperatura fue monitoreadaempleando espectroscopia de absorción en el infrarrojo (FTIR) y dicroísmo circular (CD) yse pudo determinar que ocurren cambios estructurales asociados al proceso de disociación del dímero a pH = 6.7.
