PELLIZAS CLAUDIA GABRIELA
Congresos y reuniones científicas
Título:
Evidencias del efecto directo de lipopolisacárido sobre células lactotropas en cultivo primario: presencia del receptor TLR-4
Autor/es:
SABATINO M; GUTIERREZ S; MASCANFRONI ID; PETITI J; SOSA L; PELLIZAS CG; TORRES AI; DE PAUL AL
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Previamente demostramos que lipopolisacárido (LPS) indujo
proliferación de lactotropas de hipófisis hiperplásicas. En esta in-
vestigación, se analizó la presencia de su receptor, TLR-4 y la
contribución de vía CD14/Akt/ERK1-2/NF-kB en la proliferación de
actotropas inducida por LPS. Adenohipófisis de ratas macho adul-
as tratadas con benzoato de estradiol por 60d fueron extraídas,
cultivadas y las células tratadas con: LPS (2µg/ml), E2 (100nM),
LPS+E2, por 30min. La expresión de TLR-4, CD14, p-Akt, p-ERK1/
2 fue determinada por western blot (WB) en extractos citosólicos
(EC); y NF-κB en extractos nucleares (EN) y EC, además de su
ocalización ultraestructural. La presencia TLR-4 y CD14 en
actotropas se evaluó por citometría de flujo (CF) y por
nmunofluorescencia (IF; Microscopía Confocal). Análisis estadís-
tico: ANOVA-Fisher. LPS solo o combinado con E2 aumentó
significativamente la expresión de TLR-4 y CD14 en EC y activó
Akt y ERK1/2. Además LPS incrementó los niveles de NF-kB en
EN respecto a EC indicando su translocación al núcleo (p<0.05).
El estímulo con E2 solo, no provocó cambios en la expresión de
NF-kB. Por CF se detectó marca positiva para TLR-4 y CD14 en
actotropas controles no permeabilizadas (21% y 73% respectiva-
mente), indicando su localización en membrana plasmática. No
se detectaron cambios significativos en la expresión de TLR-4 en
a superficie celular luego del tratamiento con LPS; sin embargo
hubo un aumento en el número de lactotropas positivas para CD14
(17% vs control, p<0.05). La IF confirmó la presencia de células
actotropas positivas para TLR-4 localizado tanto en membrana
plasmática como citoplasma. Nuestros Resultados demuestran la
presencia del receptor de LPS: TLR-4 en membrana plasmática
de lactotropas. Además, LPS activa la vía CD14/Akt/ERK1-2 pro-
moviendo la translocación nuclear de NF-kB para finalmente in-
ducir proliferación de lactotropas. La interacción LPS-TLR-4 re-
vela la funcionalidad del receptor en células endócrinas.
proliferación de lactotropas de hipófisis hiperplásicas. En esta in-
vestigación, se analizó la presencia de su receptor, TLR-4 y la
contribución de vía CD14/Akt/ERK1-2/NF-kB en la proliferación de
actotropas inducida por LPS. Adenohipófisis de ratas macho adul-
as tratadas con benzoato de estradiol por 60d fueron extraídas,
cultivadas y las células tratadas con: LPS (2µg/ml), E2 (100nM),
LPS+E2, por 30min. La expresión de TLR-4, CD14, p-Akt, p-ERK1/
2 fue determinada por western blot (WB) en extractos citosólicos
(EC); y NF-κB en extractos nucleares (EN) y EC, además de su
ocalización ultraestructural. La presencia TLR-4 y CD14 en
actotropas se evaluó por citometría de flujo (CF) y por
nmunofluorescencia (IF; Microscopía Confocal). Análisis estadís-
tico: ANOVA-Fisher. LPS solo o combinado con E2 aumentó
significativamente la expresión de TLR-4 y CD14 en EC y activó
Akt y ERK1/2. Además LPS incrementó los niveles de NF-kB en
EN respecto a EC indicando su translocación al núcleo (p<0.05).
El estímulo con E2 solo, no provocó cambios en la expresión de
NF-kB. Por CF se detectó marca positiva para TLR-4 y CD14 en
actotropas controles no permeabilizadas (21% y 73% respectiva-
mente), indicando su localización en membrana plasmática. No
se detectaron cambios significativos en la expresión de TLR-4 en
a superficie celular luego del tratamiento con LPS; sin embargo
hubo un aumento en el número de lactotropas positivas para CD14
(17% vs control, p<0.05). La IF confirmó la presencia de células
actotropas positivas para TLR-4 localizado tanto en membrana
plasmática como citoplasma. Nuestros Resultados demuestran la
presencia del receptor de LPS: TLR-4 en membrana plasmática
de lactotropas. Además, LPS activa la vía CD14/Akt/ERK1-2 pro-
moviendo la translocación nuclear de NF-kB para finalmente in-
ducir proliferación de lactotropas. La interacción LPS-TLR-4 re-
vela la funcionalidad del receptor en células endócrinas.
