Las c¨¦lulas dendr¨ªticas (CDs) son c¨¦lulas presentadoras de ant¨ªgeno (CPA) altamente especializadas que reconocen, procesan y presentan ant¨ªgenos a las c¨¦lulas T v¨ªrgenes para la inducci¨®n de respuestas inmunes ant¨ªgeno-espec¨ªficas. Recientemente, en nuestro laboratorio hemos proporcionado la primera evidencia de la expresi¨®n de receptores de hormona tiroidea (TRs) en CDs derivadas de m¨¦dula ¨®sea de rat¨®n y su sorprendente localizaci¨®n en el compartimiento citoplasm¨¢tico de CDs inmaduras (CDi) y maduras (CDm). Adem¨¢s, hemos demostrado que niveles fisiol¨®gicos de triiodotironina (T3) estimulan la maduraci¨®n de las CDs y la producci¨®n de IL-12 y potencian la capacidad estimulatoria de la c¨¦lula T direccionando una respuesta inmune hacia un perfil T-helper 1.
El objetivo de este trabajo fue investigar la capacidad de CDs estimuladas con T3 de modular la citotoxicidad ant¨ªgeno espec¨ªfica in vivo y la presentaci¨®n cruzada de ant¨ªgeno in vitro.
Para analizar la citotoxicidad ant¨ªgeno espec¨ªfica in vivo, 5x106 CDs fueron pulsadas con: 1)PBS(control), 2)OVA, 3)OVA+LPS(100ng/ml), 4)OVA+T3(5nM) por 30 minutos e inyectadas endovenosamente (ev) en cuatro grupos de ratones C57BL/6. Siete d¨ªas post-inmunizaci¨®n, los ratones fueron inyectados ev con una mezcla (1:1) de 10x106 esplenocitos marcados con CFSE a distintas concentraciones (0.5mM y 3¦ÌM). Las c¨¦lulas marcadas con CFSE 3¦ÌM fueron estimuladas con el p¨¦ptido OVA257-264 y las c¨¦lulas CFSE 0.5mM no fueron pulsadas y sirvieron como control interno. Veinticuatro horas post-inyecci¨®n los bazos de los ratones inmunizados fueron procesados para la determinaci¨®n de la abundancia de c¨¦lulas espl¨¦nicas marcadas con diferentes concentraciones de CFSE por citometr¨ªa de flujo. Se observ¨® que los ratones que fueron inyectados con CDs estimuladas con T3 presentaron una reducci¨®n en la poblaci¨®n CFSE 3¦ÌM. Esto demuestra que las CDs tratadas con T3 que fueron inyectadas ev en los ratones, tuvieron la capacidad de estimular a los linfocitos del rat¨®n espec¨ªficos para OVA, generando citotoxicidad ant¨ªgeno espec¨ªfica.
Para evaluar la presentaci¨®n cruzada in vitro, CDs fueron pulsadas con 1) PBS (control), 2) OVA, 3) p¨¦ptido OVA257-264, 4) OVA +T3 (5nM). Luego, las CDs fueron co-cultivadas durante toda la noche con c¨¦lulas de hibridoma B3Z en diferentes proporciones CD:B3Z. El hibridoma B3Z es un hibridoma de linfocitos T, el cual reconoce OVA ¨²nicamente cuando es presentada en el contexto MHC clase I y expresa lacZ bajo el control transcripcional del promotor de IL-2. Despu¨¦s de la co-incubaci¨®n, las c¨¦lulas se lisaron por adici¨®n de una soluci¨®n de o-nitrofenil-PD-galact¨®sido (ONPG). La cantidad de enzima lacZ se cuantific¨® mediante la hidr¨®lisis de ONPG, realizando la medici¨®n de la densidad ¨®ptica a 415 nm. Los resultados indicaron que T3 aument¨® significativamente (P <0,01) la presentaci¨®n cruzada de OVA evaluada a trav¨¦s del aumento de la actividad Lac Z. Se observ¨® que este aumento se produjo en todas las proporciones B3Z:CD.
Para evaluar si la presentaci¨®n cruzada de ant¨ªgeno inducida por T3 es dependiente de proteasoma, se procedi¨® a realizar el experimento de presentaci¨®n cruzada de la forma descripta anteriormente, pero las CDs fueron tratadas previamente con MG-132, un inhibidor del proteasoma. Se observ¨® que MG-132 inhibi¨® de manera significativa (P <0,01) la presentaci¨®n cruzada de ant¨ªgeno producida por T3. Esto evidencia que la presentaci¨®n cruzada producida por T3 es proteasoma dependiente.
En este trabajo demostramos que T3 aument¨® significativamente la capacidad de CDs para estimular una respuesta citot¨®xica ant¨ªgeno-espec¨ªfica in vivo y presentaci¨®n cruzada in vitro. Nuestros resultados proporcionan evidencia de un papel cr¨ªtico de T3 en la inducci¨®n de una respuesta citot¨®xica ant¨ªgeno-espec¨ªfica, la cual puede representar un blanco atractivo para la manipulaci¨®n racional de la inmunogenicidad de las CDs, por ejemplo en inmunoterapia, incluyendo c¨¢ncer. Tambi¨¦n puede tener profunda implicancia en los diversos des¨®rdenes inmunol¨®gicos evidenciados en las patolog¨ªas tiroideas y nos permite ampliar el conocimiento de la interacci¨®n entre los sistemas inmune y endocrino.
