Aumento de la actividad de MMPs y la capacidad migratoria de células neoplásicas tiroideas inducida por la interacción célula tumoral-fibroblastos.

DELLA VEDOVA AB; REMEDI MM; GILARDONI MB; MASINI-REPISO AM; PELLIZAS CG; DONADÌO AC

Córdoba

Jornada; Jornadas Anuales de Presentación de Trabajos Científicos de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba; 2012

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba

Introducción y Objetivos: Los tumores sólidos están constituidos por células tumorales y otros tipos celulares como células endoteliales, musculares lisas, células del sistema inmune y fibroblastos (Fb) junto a componentes de matriz extracelular (MEC), los que conforman el estroma o microambiente tumoral. El fenotipo tumoral está profundamente influenciado por su microambiente. En este sentido, proteasas como metaloproteinasas (MMPs) y enzimas del sistema fibrinolítico, liberadas por células del estroma, no sólo degradan MEC facilitando la movilidad e invasión de la célula neoplásica sino que pueden inducir inestabilidad genómica, promoviendo la tumorigénesis y la transición epitelio-mesenquimática. En un modelo de carcinoma tiroideo en ratas, fue demostrado el rol relevante de los Fb en la promoción del crecimiento tumoral in vivo. Sin embargo no existen hasta el momento estudios que profundicen en el impacto que tendría la interacción entre Fb y células tumorales tiroideas en la expresión, a nivel de célula tumoral y/o Fb, de proteínas relacionadas con la promoción de la invasión y diseminación tumoral. En el presente trabajo, utilizando un modelo in vitro que recrea la interacción célula tumoral-estroma, nos planteamos como objetivo caracterizar el impacto de la interacción célula tumoral tiroidea-Fb en la capacidad migratoria de la célula tumoral, evaluando la producción de MMPs, su grado de activación así como la migración de células tiroideas inducidas por el co-cultivo con Fb. Material y Métodos: Células tumorales tiroideas (TPC-1, 8505) y células normales de tiroides (N-ThyOri) fueron cultivadas en presencia (co-cultivos) y ausencia de Fb normales, como un modelo in vitro de la interacción célula tumoral-estroma. La evaluación de MMP2 y MMP9 se realizó en los sobrenadantes de cultivo (MCs) mediante zimografías y su localización celular en células aisladas y co-cultivadas, mediante inmunofluorescencia indirecta. La migración de células tiroideas, inducida por su incubación con MCs, se evaluó mediante el “ensayo de cierre de la herida”. En estas células el citoesqueleto de actina fue marcado con phalloidina-rodamina y utilizadas para cuantificar el porcentaje de células migratorias, considerándose móviles aquellas que presentaban filopodios y/o lamelipodios, en 10 campos seleccionados al azar. La significancia estadística se estableció utilizando un test de ANOVA de tipo paramétrico o no paramétrico según corresponda. Resultados: El co-cultivo célula tumoral tiroidea-Fb produjo un aumento en la secreción de MMP9 y MMP2 a los sobrenadantes de cultivo, destacándose el aumento de la forma activa de MMP2, tanto con células TPC-1 como 8505. El estudio de la localización celular de estas enzimas mostró el aumento de la expresión de MMP9 fundamentalmente a nivel de los Fb co-cultivados. Por otra parte, MMP2 mostró cambios en su localización celular, desde una distribución citoplasmática en Fb aislados a una localización en membrana plasmática en los Fb co-cultivados. El co-cultivo Fb-N-ThyOri no produjo cambios significativos en el perfil de MMPs secretadas. El porcentaje de células TPC-1 y 8505 que presentaban filopodios y lamelipodios aumentó significativamente en presencia de MCs obtenidos del cultivo de Fb y del co-cultivo Fb-célula tumoral. El porcentaje de células N-ThyOri migratorias no se modificó significativamente en ninguna de las condiciones ensayadas. Un aumento significativo (p≤0,05 Kruskall Wallis test) en la migración fue observado solo en las células 8505, cuando estas fueron cultivadas 24 hs con MCs obtenidos del cultivo de Fb y del co-cultivo Fb-célula tumoral. Conclusiones: La interacción célula tumoral-Fb induciría la síntesis y activación de enzimas proteolíticas, involucradas en la digestión de MEC, facilitando la migración y movilidad celular. Factores solubles sintetizados por los Fb serían relevantes en la promoción de fenotipos invasivos en la célula tumoral tiroidea.