ELEVADA PREVALENCIA DE PORTACION RECTAL DE Escherichia coli PRODUCTORA DE BETALACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO TIPO CTX-M EN BOVINOS DE TAMBOS DE CÓRDOBA

DAGATTI AGOSTINA; BUSS, FLORENCIA M; MORANDINI, FABRIZZIO NICOLÁS; BONETTO CESAR; LAMBERTI, MAXIMILIANO; PORPORATO, CARINA; DECCA LAURA; SOLA, CLAUDIA; SAKA HECTOR A

Cordoba

Jornada; PRIMERAS JORNADAS ABIERTAS DE LA ESPECIALIZACIÓN EN QUÍMICA CLÍNICA Y CONSEJO ASESOR DE ACTUALIZACIÓN PROFESIONAL; 2023

Escuela de Posgrado-FCQ-UNC

INTRODUCCIÓN La resistencia antimicrobiana (RAM) es considerada uno de los principales desafíos en salud pública a nivel global, ya que aumenta la probabilidad de fallas terapéuticas y se asocia a mala evolución clínica, altos costos y mayor riesgo de muerte. El uso inadecuado de los antimicrobianos en medicina humana es reconocido como uno de los principales factores que contribuyen a la diseminación de la RAM. Por otro lado, evidencia más reciente indica que los animales y el ambiente también son eslabones relevantes y aún poco estudiados en la circulación y diseminación de microorganismos multirresistentes a los antimicrobianos. Los Enterobacterales son un grupo de bacterias que colonizan el intestino de humanos y animales, dentro de los cuales se destaca Escherichia coli como integrante habitual de la microbiota intestinal. En las últimas décadas se ha observado una tendencia al aumento de la resistencia a los antibióticos de uso común en Enterobacterales en general, incluyendo E. coli. Los β-lactámicos (incluyendo penicilinas, cefalosporinas y carbapenémicos) son los antibióticos más prescriptos en todo el mundo debido a su eficacia, amplio espectro de acción, relativamente bajos costos y baja toxicidad. La resistencia adquirida a los β-lactámicos en Enterobacterales es mediada principalmente por β-lactamasas, siendo las β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) un grave problema ya que suelen diseminarse en plásmidos con resistencia a múltiples antibióticos y frente a ellas una de las pocas opciones disponibles son los carbapenémicos, β-lactámicos endovenosos de última línea. En múltiples países, se ha evidenciado que el aumento de la RAM suele acompañarse de una proporción cada vez mayor de humanos portadores de Enterobacterales productores de BLEE a nivel intestinal, particularmente E. coli. El concepto de "One health" o "Una salud" postulado por la OMS, afirma que la salud humana y la sanidad animal son interdependientes y están vinculadas a los ecosistemas en los cuales coexisten. En Argentina, la ganadería bovina es una de las principales actividades productivas, siendo nuestro país uno de los grandes productores de leche vacuna. En este contexto, las vacas de tambo podrían ser un componente importante en la propagación de la RAM, sin embargo, no hay estudios que hayan abordado esta cuestión. OBJETIVOS 1-Determinar la prevalencia de portación rectal de E. coli productora de BLEE en ganado bovino destinado a la producción lechera. 2-Caracterizar el perfil de sensibilidad de los aislamientos de portación rectal de E. coli productora de BLEE obtenidos de ganado bovino destinado a la producción lechera. 3-Identificar si los determinantes genéticos de BLEE más diseminados en humanos en nuestro medio (CTX-M, PER- y SHV-) están presentes en dichos aislamientos.MATERIALES Y MÉTODOSSe estudiaron 302 hisopados rectales obtenidos en noviembre de 2019 de ganado bovino (un hisopado por animal) de dos tambos localizados en la zona de Villa María, provincia de Córdoba, donde se encuentra una de las principales cuencas lecheras de Argentina. Los hisopados se sembraron primero en caldo McConkey suplementado con cefotaxima 1 μg/ml y se incubaron por 18-24 h a 35°C. Luego se realizó un subcultivo de 10 μl de dicho caldo en agar McConkey suplementado con cefotaxima 1 μg/ml por 18-24 h a 35°C. Las colonias sospechosas se tipificaron en medios cromogénicos y por métodos convencionales, y la presencia de BLEE se evaluó mediante “doble difusión por discos”. La sensibilidad se evaluó por difusión en agar según las normas vigentes del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para los siguientes antibióticos: amoxicilina-clavulánico, piperacilina-tazobactam, imipenem, meropenem, ciprofloxacina, gentamicina, amikacina, trimetoprima-sulfametoxazol, nitrofurantoína y fosfomicina. La sensibilidad a colistín se determinó mediante la técnica de “Drop test” siguiendo las recomendaciones del Laboratorio Nacional de Referencia ANLIS-Malbrán. Los determinantes genéticos de BLEE de un grupo de aislamientos elegidos al azar se identificaron mediante PCR convencional utilizando oligonucleótidos específicos para CTX-M, PER- y SHV-. El ADN templado se obtuvo a partir de cultivos frescos, mediante el método “boiling” (4-5 colonias resuspendidas en 100 μl de H2O 18 veces destilada estéril, 10 min a 95°C). Los productos de PCR se resolvieron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1% en buffer TAE1x y se visualizaron mediante tinción con SYBR-Safe (Invitrogen). Las comparaciones estadísticas se realizaron mediante Chi-cuadrado utilizando el programa MedCalc (https://www.medcalc.org/calc/index.php). RESULTADOS A partir de 302 hisopados rectales, se aislaron 259 E. coli productoras de BLEE, por lo que el 85,8% de los bovinos fueron portadores de estos microorganismos. En cuanto al perfil de sensibilidad, el 64,8% de los aislamientos fueron no sensibles a trimetoprima-sulfametoxazol, 39,5% a amoxicilina-clavulánico y piperacilina-tazobactam, 37,9% a ciprofloxacina y 0,4% a gentamicina. Todos los aislamientos fueron sensibles a nitrofurantoína, amikacina, fosfomicina, imipenem, meropenem y colistin. Se observó que el 48,0% de los aislamientos presentó fenotipo multirresistente-MDR, definido como la no sensibilidad a un agente de tres o más categorías de antimicrobianos. La identificación del tipo de BLEE se investigó en un subgrupo de 105 aislamientos elegidos al azar, de los cuales 95 correspondieron a CTX-M (90,5%), uno a PER- (0,9%) y 9 (8,6%) no resultaron CTX-M, PER-, ni SHV-. CONCLUSIONES  Se observó una prevalencia sorprendentemente alta de portación rectal de E. coli productora de BLEE en ganado bovino destinado a la producción lechera en tambos ubicados en la zona de Villa María, provincia de Córdoba, Argentina.  La resistencia acompañante a antibióticos no β-lactámicos más frecuente fue trimetoprima-sulfametoxazol (64,8%, P<0,0001), seguida de ciprofloxacina (37,9%).  El porcentaje de aislamientos MDR fue elevado (48,0%).  Existe un claro predominio de BLEE tipo CTX-M (90,5%, P<0,0001), que coincidentemente es la más diseminada en Enterobacterales de origen humano en nuestro medio.  Los hallazgos indican que los bovinos de producción lechera podrían ser un eslabón importante en la circulación de genes de resistencia clínicamente relevantes en nuestro medio e indican la necesidad de incluir al ganado vacuno en los programas de vigilancia de RAM.