Introducción y objetivos. El diclofenac (DCF) es un potente agente antiinflamatorio no esteroideo utilizado en procesos inflamatorios y dolorosos de origen rematoideo y no rematoideo. El paso de compuestos a través de la piel se puede optimizar, por medio del uso de materiales transportadores de drogas, tales como las ciclodextrinas (CDs). Las CDs mejoran la liberación del fármaco por medio de la solubilización de los compuestos lipofílicos, poco solubles en agua, en los sistemas de vehículos acuosos, entregándolos en la superficie de la piel. Aquí, los fármacos particionan desde la cavidad del receptor hacia la barrera lipofílica de la piel. Los estudios de absorción transdermal in vitro se realizan utilizando una celda de difusión de Franz y muestras de piel. Para estos estudios, es necesario desarrollar un procedimiento analítico apropiado que permita la determinación del fármaco en estudio, tanto en el compartimiento receptor de la celda de Franz, como así también, la cantidad acumulada del fármaco en la piel luego de finalizado el estudio. El método analítico debe ser específico, ya que esta clase de muestras suelen estar contaminadas con compuestos endógenos, como nucleótidos, que absorben en el UV, y nucleósidos. Sin embargo, el método también tiene que ser lo suficientemente sensible, debido al limitado volumen de muestra que se obtiene y la baja concentración del fármaco presente en el medio receptor y la piel. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un procedimiento analítico por HPLC para la determinación de diclofenac y su complejo con metil-ß-cidclodextrina (Me-ß-CD) en estudios de permeación in vitro a través de la piel humana.
Materiales y Métodos. El diclofenac fue obtenido por neutralización de la sal sódica con ácido clorhídrico. El complejo con Me-ß-CD se obtuvo por liofilización de la mezcla acuosa de los componentes individuales. Las determinaciones por HPLC se realizaron con un cromatógrafo líquido de alta presión (Agilent 1100 Series) constituido por un injector automático estándar, micro y preparatorio Agilent Serie 1100, un sistema de bombeo isocrático Serie Agilent 1100, un compartimento termostatizado de columna Serie Agilent 1100, un detector de diodos y de longitud de onda múltiple Agilent Serie 1100. Las condiciones cromatográficas fueron las siguientes: fase móvil [metanol: buffer de fosfato pH 7,4 (PBS) 60:40], modo isocrático,
Resultados. Las curvas de calibración (n = 11) mostraron buena linealidad en el rango de concentración examinado (0,32 ? 56,4 µg/ml). La ecuación de regresión del gráfico fue 153,2 x + 13,1 (r = 0,999). Los coeficientes de variación inter.- e intradía fueron menores al 5%. Los límites de detección y cuantificación fueron 2,29 µg/ml y 6,95 µg/ml, respectivamente.
Conclusiones. Se desarrolló un procedimiento cromatográfico simple que permite la determinación rápida y precisa de diclofenac, tanto en la piel como en las muestras obtenidas del medio receptor, en estudios de permeación in vitro.
