BOCCO JOSE LUIS
Congresos y reuniones científicas
Título:
El factor de transcripción KLF6 es inducido por activación oncogénica de RAS: Oncogénesis o antioncogénesis
Autor/es:
BOCCO J.L.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
El factor de transcripción KLF6 (Krüppel-like Factor 6) fue identificado en nuestro laboratorio sobre la base de sus propiedades de unirse a una secuencia de DNA esencial para la transcripción de un grupo de genes cuyos promotores carecen de TATA-box, codificantes de las proteínas PSG (Pregnancy-Specific Glycoproteins). El clonado molecular de la versión murina de KLF6 indicó una elevada conservación de la secuencia primaria de KLF6, superior al 98 %, con la especie humana sugiriendo además una función conservada en ambas especies. En relación al rol biológico principal de KLF6, estudios independientes informaron que mutaciones en el gen klf6 están asociadas con el desarrollo de diferentes neoplasias humanas como carcinoma de próstata, glioblastoma y cáncer colorrectal, apoyando la hipótesis de que KLF6 es un potencial supresor tumoral. Además, en ausencia de mutaciones somáticas que afecten el gen, la expresión del mRNA de KLF6 está disminuida en la mayoría de los casos de cáncer de pulmón conformado por células no pequeñas. Asimismo, la expresión de KLF6 en células de glioblastoma multiforme revierte su tumorigenicidad e inhibe la transformación inducida por diversos oncogenes incluyendo Ras. Más aún, se ha reportado una correlación significativa entre la señalización de Ras activado con un incremento de una variante de splicing de KLF6 (KLF6-SV1) cuya función es oncogénica y antiapoptótica, en contraposición de la función supresora de tumor asignada a la isoforma normal de KLF6 (wtKLF6). Uno de los mecanismos propuestos para wtKLF6 es la activación transcripcional del gen que codifica a la proteína p21(CIPI/WAF1) de manera independiente de p53, produciendo una inhibición del ciclo celular. Resultados aportados por nuestro grupo proporcionaron un nuevo mecanismo de KLF6 para el control del ciclo celular que involucra la inducción de la degradación de la proto-oncoproteína c-Jun por la vía ubiquitina-proteasoma, y consecuentemente una reducción de la transcripción dependiente de c-Jun. En este contexto, es oportuno citar que entre las proteínas que componen la familia AP-1, c-Jun tiene propiedades únicas, para promover la proliferación celular. De hecho, las células deficientes en la expresión de c-Jun (c-jun -/-) son incapaces de proliferar, propiedad que se recupera luego de la re-introducción de c-Jun en las mismas. Diversas publicaciones han aportado evidencias mostrando que c-Jun coopera eficientemente con las variantes del oncogen Ras tanto en la transformación celular como en la oncogénesis, estimulando la fosforilación de c-Jun a través de la vía de señalización de JNK (c-Jun N-terminal Kinase). Debido a la interacción funcional que hemos demostrado entre KLF6 y c-Jun, un interrogante biológico interesante que cabe preguntarse es si KLF6 tiene la capacidad de interferir en la activación oncogénica de la vía Ras/c-Jun. A fin de indagar ese objetivo, se analizaron los efectos de KLF6 a nivel de la proliferación y transformación de fibroblastos NIH 3T3, transducidos de manera estable con una mutante activada constitutivamente de Ras, H-Ras(G12V), cuya expresión es inducible por tetraciclina. Entre las diferentes isoformas de Ras, H-RasG12V es la variante que muestra mayor poder tumorigénico en fibroblastos NIH3T3. Los resultados indican que la inducción de H-RasG12V incrementa la expresión endógena de KLF6 de manera dependiente de JNK. Una posible hipótesis que surge de este resultado es que KLF6 es requerido para la oncogénesis dependiente de Ras. Alternativamente la inducción de KLF6 sería parte de una respuesta de defensa celular ante la activación oncogénica. Experimentos de silenciamiento génico de KLF6 demuestran un rol supresor de tumor de KLF6 el cual es anulado por Ras activado. No obstante, la sobre-expresión de KLF6 junto con H-Ras(G12V) promueve un arresto del ciclo celular en la fase G1 y fue capaz de revertir el fenotipo celular transformado, típicamente inducido por Ras oncogénico, como la pérdida de la inhibición por contacto y la formación de colonias en soft agar. Más aún, se observó una reducción del crecimiento tumoral en ratones inmunodeficientes, generados a partir de células que contienen H-RasG12V, lo cual se asoció a una disminución del índice proliferativo medido por Ki-67 (RasG12V-KLF6 vs RasG12V-lacZ control, p<0,001). Estos resultados se correlacionaron con un aumento significativo de los niveles de expresión del inhibidor de CDK, p21(CIPI/WAF1), mientras que el arresto en la fase G1 mediado por KLF6 fue suprimido por el silenciamiento de p21(CIPI/WAF1). En este contexto, ni la inducción de p53 ni la muerte celular por apoptosis fueron detectadas. Interesantemente, esta respuesta citostática de KLF6 se correlaciona directamente con una resistencia a la apoptosis causada por drogas quimioterapéuticas que producen daño al DNA. En conclusión, la expresión endógena de KLF6 se induce en respuesta a H-RasG12V, sugiriendo que KLF6 es parte de mecanismo de protección celular activado por estrés oncogénico y desempeña una función relevante en la supresión de tumores.