Prop¨®sito: Las c¨¦lulas de M¨¹ller (CM) son c¨¦lulas gliales de la retina que preservan la estructura y funci¨®n de los fotoreceptores durante la degeneraci¨®n retinal. Recientemente ha sido demostrado que estas c¨¦lulas participan en el proceso de neovascularizaci¨®n bajo condiciones de hipoxia pero los mecanismos moleculares involucrados son al presente poco conocidos. LRP-1 es un receptor endoc¨ªtico multiligando expresado en neuronas, macr¨®fagos, fibroblastos y junto con a2-M participa en el control de la prote¨®lisis extracelular. Al respecto, resultados previos de nuestro grupo demuestran que el Sistema a2-Macroglobulina/LRP-1 es expresado en retinas de ratas con neovascularizaci¨®n inducida por hipoxia sugiriendo que LRP-1 puede modular la neovascularizaci¨®n retinal. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue caracterizar a nivel molecular un cultivo primario de c¨¦lulas gliales aisladas de retina de rat¨®n con el prop¨®sto de, en primer lugar, identificar en CM la expresi¨®n de LRP-1, y en segundo lugar, emplear este cultivo primario para futuros estudios relacionados con el proceso neovascular.
M¨¦todos: Las c¨¦lulas gliales fueron aisladas de ratones C57BL/6 mediante digesti¨®n enzim¨¢tica y mec¨¢nica y luego caracterizadas por inmunocitoqu¨ªmica para marcadores espec¨ªficos tales como CRALBP, vimentina y GFAP. La expresi¨®n de LRP-1 fue analizada por western blot e inmunocitoqu¨ªmica.
Resultados: Aproximadamente el 95-100% de las c¨¦lulas gliales fueron M¨¹ller a juzgar por la expresi¨®n de los marcadores espec¨ªficos. M¨¢s del 95% de las c¨¦lulas fueron positivas para CRALBP y vimentina y menos del 2% fueron positivas para GFAP. Por ensayos de Western blot, se detect¨® expresi¨®n de LRP-1 utilizando un anticuerpo dirigido contra la cadena ¦Â del receptor y estos resultados fueron corroborados por ensayos de inmunofluorescencia.
Conclusiones: Se obtuvieron cultivos primarios altamente enriquecidos en CM con capacidad de expresar LRP-1. Estos cultivos constituyen una importante herramienta experimental para el estudio de la neovascularizaci¨®n involucrando al Sistema a2-Macroglobulina/LRP-1.
