Alfa-2 Macroglobulina regula la actividad extracelular de Metaloproteinasas y modifica el citoesqueleto en c¨¦lulas de M¨¹ller.
Barcelona PF; Ortiz S; Riera CM; Chiabrando G; S¨¢nchez MC.
CIBICI (CONICET)- Departamento de Bioqu¨ªmica Cl¨ªnica, Facultad de Ciencias Qu¨ªmicas, UNC. pbarcelona@mail.fcq.unc.edu.ar
Objetivos: La hipoxia, la proteolisis de la membrana basal y la reorganizaci¨®n del citoesqueleto celular son factores claves en la neovascularizaci¨®n. En este proceso tiene una activa participaci¨®n el complejo tri-molecular conformado por las Metaloproteinasas (MMPs) MMP-2 y MT1-MMP y el inhibidor, TIMP-2. Ensayos in vivo e in vitro han demostrado un incremento en la expresi¨®n del sistema LRP-1/¦Á2-M asociado con una elevada actividad de MMPs durante la neovascularizaci¨®n retinal predominantemente en las c¨¦lulas de M¨¹ller. En este trabajo evaluamos el efecto de ¦Á2-macroglobulina (a2-M) sobre la actividad de MMPs y reorganizaci¨®n del citoesqueleto de actina en una l¨ªnea celular humana de c¨¦lulas gliales retinales (MIO-M1) que expresa constitutivamente el receptor de ¦Á2-M, LRP-1.
Materiales y M¨¦todos: La c¨¦lulas MIO-M1 se cultivaron en presencia de a2-M (60 nM). La actividad de MMP-2 y MMP-9 fue analizada en los sobrenadantes de medios celulares (SMC) por zimograf¨ªa en gelatina. La expresi¨®n de MT1-MMP, TIMP-2, GFAP y ¦Á-actina, utilizando ensayos de inmunofluorescencia (IF). El nivel de RNAm de MT1-MMP, MMP-2, TIMP-2 fue analizado por RT-PCR.
Resultados: a2-M increment¨® la actividad de MMP-2 en SMC de c¨¦lulas MIO-M1. Por RT-PCR se observ¨® que, aunque a2-M no modific¨® la expresi¨®n de MMP-2, indujo la producci¨®n de MT1-MMP y TIMP-2 en forma dependiente del tiempo, lo cual correlacion¨® con la actividad de MMP-2. Por IF se observ¨® que MT1-MMP, por acci¨®n de a2-M, se localiza predominantemente sobre la superficie celular incluso a nivel de los procesos celulares. Tambi¨¦n se demostr¨® cambio en la expresi¨®n de ¦Á-actina, lo cual representa una modificaci¨®n del citoesqueleto. Finalmente, a2-M increment¨® la expresi¨®n de GFAP, asoci¨¢ndose con un proceso de activaci¨®n glial.
Conclusiones: ¦Á2-M incrementa la actividad extracelular de MMP-2, lo cual estar¨ªa directamente asociado con un aumento en la expresi¨®n de MT1-MMP y TIMP-2 as¨ª como con modificaciones del citoesqueleto de ¦Á-actina y activaci¨®n glial. Estos resultados sugieren que el sistema ¦Á2-M/LRP-1 regula la capacidad migratoria de las c¨¦lulas gliales de M¨¹ller durante la neovascularizaci¨®n retinal.
